[发明专利]抗血管新生融合蛋白

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体说地涉及抑制血管新生的重组DNA序列、该DNA序列表达的融合蛋白及其在病理性血管新生疾病治疗药物中的应用。

背景技术

在正常情况下，成人体内的血管绝大多数处于静止状态，血管新生只见于少数病理或生理状态。生理状态仅发生于创伤修复，组织再生和妇女的生理周期。病理情况发生于肿瘤，类风湿性关节炎，糖尿病性视网膜病和干癣，年龄相关的黄斑变性(AMD)。肿瘤血管新生是肿瘤生长和转移的“命脉”。(Hanahanand Folkman，Cell，1996，86：353-364)。近年来，抗血管新生治疗成为肿瘤等疾病治疗的热点和最有前途的领域。

血管生成由多个血管生成促进因子和抑制因子组成的复杂系统调节，成人的血管生成严格受此促进和抑制平衡调节。VEGF对血管内皮细胞基膜的水解、迁移和血管构建的调节作用强，特异性高，是目前发现的主要特异促血管生成因子。(Folkman J，et al.Science1987；235：442；Giampietro G，etal.Cancer Metastassis Rev 1994；Ferrara.Endocrine Reviews2004，25(4)：581-611)因此，针对VEGF信号通路的抗血管新生治疗成为抗肿瘤和类风湿性关节炎等疾病的重要治疗靶点。

VEGF受体有3种，flt-1(fms-like tyrosine kinase，VEGFR-1)，Flk-1/KDR(fetal liver kinase 1-murine homologue/Kinase insert Domain containingReceptor-human homologue，VEGFR-2)和flt-4(VEGFR-3)。VEGFR-1，2，主要分布于血管内皮细胞表面，VEGFR-3主要分布于淋巴内皮。他们由含7个免疫球蛋白样结构的细胞外区、膜区及酪氨酸激酶区组成。该酪氨酸激酶的活性通过受体和配体结合而激活，由受体磷酸化而引起细胞内许多酶和其他反应。其中Flk-1(KDR)在内皮细胞的增殖和血管生成起决定作用。

通过抗VEGF抗体和可溶性VEGF受体片断可以阻断VEGF与血管内皮细胞上VEGF受体(flt-1，KDR等)之间的相互作用，从而阻止由VEGF介导的信息传导，抑制由VEGF高表达而引起的病理性新生血管的生长。这类VEGF抑制剂包括Avastin(bevacizumab)，Lucentis，VEGF-Trap等，用于治疗血管新生相关的疾病。2004年美国FDA批准的针对血管新生的抗癌药物Avastin就是特异性结合VEGF的单克隆抗体，其机理就是通过结合VEGF达到阻断VEGF与其受体结合的目的(Ferrara et al，Nature Reviews Drug Discovery.2004，3：391-400)。但是Avastin有两个主要缺点：1.亲和力较低2.3＊10^-9，抗体用量大。2.没有PLGF结合能力。

因此，理想化的VEGF阻断剂是VEGF受体的细胞外片段，其具有天然的针对VEGF的高特异性和亲和力(Kuo et al，Proceedings of the NationalAcademy of Sciences，2001，98：4605-4610)，比Avastin的亲和力高20-100倍(Ferrara N et al，Nature medicine.2003，9：669-676)。近年来的研究表明，抗PLGF可以抑制肿瘤的血管新生和转移，可以显著增强抗VEGF的抗血管新生治疗效果，并且可以抑制一些抗VEGF治疗无效的肿瘤生长(Fischer C.et al，cell，131：463-475)。因此利用flt-1与PLGF也具有高亲和力(Christinger，HW.Et al，J.Biol.Chem.2004，279(11)：10382-8)的特点，用含有flt-1受体片段的融合蛋白可以结合VEGF和PLGF具有更加优良的抗血管新生治疗效果。