[发明专利]白血病融合基因的联合并行检测方法及诊断试剂盒

权利要求书

1.一种白血病融合基因的联合并行检测方法，包括以下步骤：

(1)包含10种不同荧光编码的羧基微球Beads，每种微球上分别共价结合针对白血病中染色体易位形成的10种融合基因的mRNA所设计的特异性核酸探针；

(2)针对不同白血病类型中染色体易位所形成的10种融合基因的mRNA，分别设计上下游引物，对不同的融合基因mRNA，通过逆转录PCR扩增出相应的产物；

(3)含有特异性核酸探针的微球与融合基因mRNA的逆转录扩增产物混合杂交，加入链霉亲和素-藻红蛋白Streptavidin-PE后，通过液相芯片法xMAP检测荧光信号；

(4)将检测到的荧光信号与内参基因的荧光信号进行比较，从而确定检测样品中是否存在白血病融合基因，以及样品中融合基因的表达状况。

2.如权利要求1所述的白血病融合基因的联合并行检测方法，其特征在于，所述的微球是色彩编码微球Color-coded beads，其平均直径为5.6μm，是结合了不同荧光染料的聚苯烯微球。

3.如权利要求1所述的白血病融合基因的联合并行检测方法，其特征在于，所述的白血病中染色体易位形成的融合基因是针对以下10种可以自由组合的融合基因：

BCR-ABL b2a2、BCR-ABL b3a2、BCR-ABL e1a2、E2A-PBX1、TEL-AML1、MLL-AF4e10/e4、CBFB-MYH11 A type、AML1-ETO、PML-RARA L form、PML-RARA S form。

4.如权利要求1所述的白血病融合基因的联合并行检测方法，其特征在于，所述的共价结合于微球上的10条特异性核酸探针，包括如下序列，其中5’端含氨基修饰：

BCR-ABL b2a2：5’-AminolinkerC12TGAAGGGCTTCTTCCTTATT-3’，如SEQ IDNO.1所示；

BCR-ABL b3a2：5’-AminolinkerC12TGAAGGGCTTTTGAACTCTG-3’，如SEQ ID NO.2所示；

BCR-ABL e1a2：5’-AminolinkerC12TGAAGGGCTTCTGCGTCTCC-3’，如SEQ ID NO.3所示；

E2A-PBX1：5’-AminolinkerC12TACTCAAAACACTGTAGGAG-3’，如SEQ ID NO.4所示；

TEL-AML1：5’-AminolinkerC12TCCAAGTATGCATTCTGCTA-3’，如SEQ ID NO.5所示；

MLL-AF4e10/e4：5’-AminolinkerC12AGTAGGTCTGCTTAAAGTCC-3’，如SEQ IDNO.6所示；

CBFB-MYH11A type：5’-AminolinkerC12GCTCATGGACCTCCATTTCC-3’，如SEQID NO.7所示；

AML1-ETO：5’-AminolinkerC12TCAGTACGATTTCGAGGTTC-3’，如SEQ ID NO.8所示；

PML-RARA L form：5’-AminolinkerC12GTCTCAATGGCTGCCTCCCC-3’，如SEQ IDNO.9所示；

PML-RARA S form：5’-AminolinkerC12GTCTCAATGGCTTTCCCCTG-3’，如SEQ IDNO.10所示；

或者包含有上述序列的向5’端或/和3’端延长的序列；

或者与上述序列同源性大于85％的序列；

或者与上述序列的碱基互补序列；

或者使用上述所有序列中的任意一种或一种以上的组合。