[发明专利]吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法

权利要求书

1、一种吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，包括步骤：

1)提取受检者样本DNA；

2)对样本DNA进行目的基因的PCR扩增、纯化、片段化及荧光素标记，所述目的基因包括CYP1B1基因，MIR196A2基因，TP53基因，SULT1A1基因，ERCC1基因，MDM2基因，KRAS基因，CYP1A1基因，CHRNA5基因，CHRNA3基因，rs6983267位点和GSTP1基因；

3)荧光素标记的PCR产物进行基因芯片杂交，检测目的基因的SNP位点；

4)对样本DNA进行GSTM1和GSTT1基因的PCR扩增，然后进行琼脂糖凝胶电泳检测GSTM1和GSTT1基因的缺失情况；

5)根据步骤3)、4)得到的基因分型结果，分析受检者肺癌的风险率。

2、如权利要求1所述的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤2)中的CYP1B1基因的引物是SEQ ID NO：27～28所示序列的引物，MIR196A2基因的引物是SEQ ID NO：29～30所示序列的引物，TP53基因的引物是SEQID NO：31～32所示序列的引物，SULT1A1基因的引物是SEQ ID NO：33～34所示序列的引物，ERCC1基因的引物是SEQ ID NO：35～36所示序列的引物，MDM2基因的引物是SEQ ID NO：37～38所示序列的引物，KRAS基因的引物是SEQ ID NO：39～40所示序列的引物，CYP1A1基因的引物是SEQ ID NO：41～44所示序列的引物，CHRNA5基因的引物是SEQ ID NO：45～46所示序列的引物，CHRNA3基因的引物是SEQ IDNO：47～48所示序列的引物，rs6983267位点的引物是SEQ ID NO：49～50所示序列的引物，GSTP1基因的引物是SEQ ID NO：51～52所示序列的引物。

3、如权利要求1所述的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤2)中的片段化是将纯化的PCR产物经测定浓度后，用DNase I进行片段化；

所述荧光素标记是将片段化PCR产物利用脱氧核苷酸转移酶在3’末端进行荧光素标记。

4、如权利要求1所述的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤3)基因芯片的制备是将预先设计并合成好的探针通过接触式点样或喷墨式点样点载到玻片或硅片材质的固相载体片基上，其中，探针是SEQ ID NO：1～SEQ IDNO：26所示序列的DNA探针。

5、如权利要求1所述的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤3)目的基因的SNP位点包括：CYP1B1基因的rs1056836位点，MIR196A2基因的rs11614913位点，TP53基因的rs1042522位点，SULT1A1基因的rs9282861位点，ERCC1基因的rs3212986位点，MDM2基因的rs2279744位点，KRAS基因的rs61764370位点，CYP1A1基因的rs2606345和rs1048943位点，CHRNA5基因的rs667282位点，CHRNA3基因的rs1051730位点，rs6983267位点及GSTP1基因的rs1695位点。

6、如权利要求1所述的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤4)中的GSTM1基因的引物是SEQ ID NO：53～54所示序列的引物、GSTT1基因的引物是SEQ ID NO：55～56所示序列的引物。

7、如权利要求1所述的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，其特征在于：所述步骤5)中的基因分型结果导入吸烟肺癌评估软件进行受检者肺癌风险指数和风险率评估。

8、如权利要求1或7所述的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，其特征在于：所述肺癌风险指数评估标准：一个易感基因为+1分；一个保护基因为-1分；无易感基因和保护基因为0分；60岁及以上+4分；肿瘤家族史为+2分；其中，易感基因是指增加个体肺癌风险性的基因，其比数比大于1；保护基因是指降低个体肺癌风险性的基因，其比数比小于1。

9、如权利要求8所述的吸烟引发肺癌风险基因测评及套组方法，其特征在于：所述风险率评估标准：肺癌风险指数1～3分，个体患肺癌的风险为中度；肺癌风险指数4～6分，个体患肺癌的风险为高度；肺癌风险指数6分以上，患肺癌的风险为极高度。