[发明专利]一种乳酸菌高密度培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及乳酸菌的一种高密度培养方法，属于微生物发酵工程领域。

背景技术

乳酸菌作为一类被公认的安全的微生物，长期用于多种发酵制品的加工，已被人类食用了上千年。乳酸菌对人体健康的调节作用，如调节胃肠道菌群组成、预防和治疗各种腹泻、免疫调节、抗高血压、抗氧化性、降低血清胆固醇等已得到广泛研究和论述。

我国《益生菌类保健食品申报与审评规定》规定：活菌类益生菌保健食品在其保质期内活菌数目不得少于106cfu/mL(g)。可以看出，乳酸菌菌剂的活性与其数量密切相关，因此，乳酸菌的高密度培养技术就成为了乳酸菌推广应用的关键。

由于乳酸菌生长的营养要求较高，需要一些特殊的营养组分；同时，乳酸菌在生长过程中分泌有机酸类代谢产物，使培养液中的pH值不断下降，当pH值降至4.10以下时，菌体的生长繁殖就会受到抑制，因此采用传统的菌种生产工艺，菌种质量得不到保证，而且生产成本高。高密度培养技术广泛地应用于各种微生物的生产中，它是指采用一定的工艺技术，保证微生物生长的适宜条件，延长微生物的指数增殖过程，从而得到高浓度的细胞。乳酸菌的高密度培养增加了单位体积培养液中的菌体数量，降低了生产成本，从而提高产品在市场上的竞争力。对于加速乳酸菌制剂的商品化进程，更好地满足市场需求，具有重要的意义。

发明内容

本发明提供了乳酸菌的一种高密度培养技术，通过使用专门的培养基(以下称乳酸菌培养基)，其基础配方包括：1％大豆蛋白胨、1％酵母浸提粉、1％葡萄糖、4％无机盐溶液、0.05％半胱氨酸盐酸盐等，并在培养过程中流加碱以调节培养液的pH值，延长乳酸菌对数生长期，获得高活性、高浓度的培养液，培养液中乳酸菌活菌数达到3.0-5.0×10¹²cfu/g。培养的乳酸菌可应用于饲料青贮、乳制品接种、其它食品添加剂(如奶酪制作、葡萄酒脱酸)及医用等。

具体实施方式

本发明以嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌、粪肠球菌为菌种，经常规方法活化后、接种于乳酸菌培养基，调节起始pH值为7.0-7.2；在培养过程中流加碱使培养液的pH值稳定在6.0-6.8。

实施例1：

挑取活化的嗜酸乳杆菌于MRS液体培养基中，37℃培养12h，以6％的接种量接种到含乳酸菌培养基的发酵罐中，培养基起始pH值为7.0，当pH值低于6.6时流加30％Na₂CO₃溶液，保持培养液pH值稳定在6.7±0.1，37℃培养30h。

实施例2：

挑取活化的嗜酸乳杆菌于MRS液体培养基中，37℃培养12h，以6％的接种量接种到含乳酸菌培养基的发酵罐中，培养液起始pH值为7.0，当pH值低于6.6时流加20％NaOH溶液，保持培养液pH值稳定在6.7±0.1，37℃培养30h。

实施例3：

挑取活化的发酵乳杆菌于MRS液体培养基中，37℃培养12h，以10％的接种量接种到含乳酸菌培养基的发酵罐中，培养液起始pH值为7.2，当pH值低于6.0时流加20％KOH溶液，保持培养液pH值稳定在6.2±0.2。42℃培养24h。

实施例4：

挑取活化的发酵乳杆菌于MRS液体培养基中，37℃培养12h，以10％的接种量接种到含乳酸菌培养基的发酵罐中，培养液起始pH值为7.2，当pH值低于6.0时流加氨水，保持培养液pH值稳定在6.2±0.2。42℃培养24h。

实施例5：

挑取活化的粪肠球菌于MRS液体培养基中，32℃培养12h，以6％的接种量接种到含乳酸菌培养基的发酵罐中，培养液起始pH值为7.2，当pH值低于6.4时流加30％Na₂CO₃溶液，保持培养液pH值稳定在6.5±0.1，32℃培养30。