[发明专利]含日本血吸虫基因的重组表达载体及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种含日本血吸虫基因的重组表达载体及应用。

背景技术

血吸虫病是一种广泛流行于热带与亚热带地区的人兽共患寄生虫病，所引发的病原体是 血吸虫，我国主要受日本血吸虫的危害。日本血吸虫的生活周期复杂，包括在终末宿主体内 的有性世代和在中间宿主体内的无性世代的交替。其终末宿主主要包括人、牛、羊、猪、兔 等多种哺乳动物，虫体即吸附在其门静脉和肠系膜静脉的内壁上。宿主的血液处于一种有氧 呼吸的环境，而虫体要实现其长期寄生，必然有一套克服氧自由基所带来的损害的机制，其 中抗氧化酶的作用至关重要，硫氧还蛋白过氧化物酶家族(thioredoxin peroxindases family)即是其中的一类。

硫氧还蛋白过氧化物酶家族在多种细胞功能中发挥重要作用，如抗氧化损伤保护蛋白和 脂质，细胞增殖、分化，调节凋亡过程中细胞内信号传导等。增加细胞内抗氧化酶水平可抑 制凋亡。硫氧还蛋白过氧化物酶家族是红细胞中主要的抗氧化剂，并且介导早期红细胞系的 分化。该家族所包含的一类过氧化物酶，能够利用其活性半胱氨酸残基清除过氧化物及羟基。 根据氨基酸序列的差异，硫氧还蛋白过氧化物酶家族有六个亚型，并被分为两大亚家族。亚 家族一含有两个保守性半胱氨酸残基，包括I、II、III、IV四个亚型，亚家族二拥有一个保 守性半胱氨酸残基，包括V和VI两个亚型。目前研究表明，硫氧还蛋白过氧化物酶II(tpII) 具有硫氧还蛋白依赖的过氧化物酶活性，能够抑制细胞凋亡，与细胞膜结合，与红细胞中钙 离子激活的钾离子转运相关。

另有研究表明，硫氧还蛋白过氧化物酶II富集于日本血吸虫的皮质层，而皮质层是虫体 与宿主环境直接发生相互作用的表面结构，推测该酶在维系皮质层膜结构的稳定以及拮抗药 物作用方面起重要作用。

疫苗是控制传染性疾病的有效手段，也是血吸虫病综合防治的重要措施之一，世界卫生 组织专家认为，短效的化疗手段必须与长效的疫苗措施相结合。尽管目前所有实验性血吸虫 病疫苗在免疫后均只能诱导出对血吸虫感染部分抵抗力，但由于血吸虫在其终宿主体内不繁 殖，故对控制血吸虫病仍有重要的生物学与临床意义。寻找新的疫苗候选抗原仍是当今血吸 虫疫苗研究的重点之一。

到目前为止，还没有出现关于本发明日本血吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶II作为疫苗应用 的研究报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种含日本血吸虫基因的重组表达载体，该重组载体表 达的日本血吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶II可作为抗血吸虫的疫苗候选抗原。

此外，还需要提供一种含日本血吸虫基因的重组表达载体在制备预防或治疗血吸虫病的 疫苗中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

在本发明的一个方面，提供了一种含日本血吸虫基因的重组表达载体，所述基因是日本 血吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶II基因。

优选的，所述日本血吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶II基因序列是编码SEQ ID NO：1所示氨 基酸序列的核苷酸序列；更优选的，该日本血吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶II基因序列为SEQ ID NO：2所示核苷酸序列。

优选的，所述表达载体为原核表达载体；更优选的，所述表达载体为原核表达载体 pET28a(+)。

在本发明的另一方面，提供了一种包含上述重组表达载体的大肠杆菌宿主细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种日本血吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶II的制备方法， 包括以下步骤：

构建含日本血吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶II基因的重组表达载体；

将所述重组表达载体转化入大肠杆菌宿主细胞；

培养包含重组表达载体的大肠杆菌宿主细胞，并在合适条件下，诱导该重组表达载体表 达日本血吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶II；

纯化诱导表达的日本血吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶II。

优选的，所述诱导表达的日本血吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶II还连接有包含6个组氨酸 的标签序列。

在本发明的另一方面，还提供了一种上述重组表达载体在制备预防或治疗血吸虫病的疫 苗中的应用。

在本发明的另一方面，还提供了一种上述重组表达载体在制备诊断血吸虫病的产品中的 应用。