[发明专利]一种α-氨基酸酯水解酶制备非均相生物催化剂的方法有效
| 申请号： | 200910058710.9 | 申请日： | 2009-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN101845432A | 公开（公告）日： | 2010-09-29 |
| 发明（设计）人： | 蒋宁;斯克利亚仁科·安娜;蒋用;库偌什金娜·瓦连金娜;胡远辉;萨塔偌娃·热尼;王明蓉;克列斯季安洛瓦·伊琳娜;霍强;熊辉 | 申请（专利权）人： | 中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所;俄罗斯联邦国家科学中心工业微生物遗传育种研究所 |
| 主分类号： | C12N11/08 | 分类号： | C12N11/08;C12R1/64 |
| 代理公司： | 成都信博专利代理有限责任公司 51200 | 代理人： | 陶红 |
| 地址： | 610052 四川省成都市成*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 氨基酸 水解 制备 均相 生物 催化剂 方法 | ||
1.一种α-氨基酸酯水解酶制备非均相生物催化剂的方法，其步骤如下：
1)取VKPM B-9915或CGMCC No.2339菌株的菌丝体细胞不做冷冻处理而直接悬浮于Tris-HCl缓冲液中，加入巯基乙醇以稳定酶；
2)加入乙酸丁酯破碎菌丝体细胞，加热，将反应器温度维持在30℃，控制初始pH值不得高于pH8.0，在反应过程中pH值会下降，在下降到pH7.1时，滴加12.5％氨溶液以维持pH 7.1±0.1，6-7小时50分钟后，氨溶液的消耗速度与初始值比较降低1.8-2.0倍时，酶提取过程完成；
3)将酶提取液快速冷却至15-20℃，加入絮凝剂，离心分离破碎的菌丝体细胞，得无细胞提取液，残渣用乙酸钠缓冲液洗涤，洗涤液离心分出，并入无细胞提取液中，调节pH到6.8-7.2范围内；
4)把无细胞提取液加入反应器，冷却至2-4℃，加聚乙二醇到无细胞提取液中，搅拌15分钟，再加入25％戊二醛水溶液反应混合物在2-4℃下轻微摇动，孵化2小时，将制得的固体颗粒减压滤出，洗涤至滤液无色制得交联蛋白(酶)聚集体形态的湿的无载体非均相生物催化剂。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于菌丝体细胞不做冷冻处理而直接悬浮于Tris-HCl缓冲液中时其温度不高于20℃。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于用作絮凝剂的是水溶性的多聚阴离子含有季铵盐基的Flocaton PPS-400。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于聚乙二醇的分子量为6000-8000。
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