[发明专利]一种骨髓间充质干细胞向上皮细胞分化的诱导液及其制备和应用

权利要求书

1.一种骨髓间充质干细胞定向分化上皮细胞诱导液，其特征在于：其由上皮细胞培养液与L-DMEM以2∶1～1∶2的体积比混合而成，内含6％v/v胎牛血清。

2.根据权利要求1所述的上皮细胞诱导液，其特征在于：所述的上皮细胞为口腔粘膜上皮细胞，上皮细胞培养液与L-DMEM的体积比为1∶1。

3.根据权利要求1或2所述的上皮细胞诱导液，其特征在于：其蛋白浓度为1500～2500μg/ml。

4.根据权利要求1～3任一一项所述的上皮细胞诱导液，其特征在于：所述的上皮细胞培养液由以下方法制备：

a、将口腔粘膜上皮细胞接种于DK-SFM中培养，接种浓度1×10⁵个/cm²种于25cm²培养瓶中，于37℃、5％CO₂培养箱中培养24±6小时，换液，吸弃未贴壁细胞及培养液，更换新鲜培养液；

b、首次换液后，每隔2d收集一次上皮细胞培养液，并更换新鲜培养液；

c、混合收集到的上皮细胞培养液，即得。

5.根据权利要求4所述的上皮细胞诱导液，其特征在于：所述的上皮细胞培养液由1～3代上皮细胞培养过程中收集的培养液混合而成。

6.制备权利要求1所述的上皮细胞诱导液的方法，包括：

①制备上皮细胞培养液：

a、将口腔粘膜上皮细胞接种于DK-SFM中培养，接种浓度1×10⁵个/cm²种于25cm²培养瓶中，于37℃、5％CO₂培养箱中培养24±6小时，换液，吸弃未贴壁细胞及培养液，更换新鲜培养液；

b、首次换液后，每隔2d收集一次上皮细胞培养液，并更换新鲜培养液；

c、混合收集到的上皮细胞培养液，备用；

②将上皮细胞培养液与L-DMEM以2∶1～1∶2的体积比混合，并加入胎牛血清，使混合液含6％v/v胎牛血清，即得。

7.根据权利要求6所述的上皮细胞诱导液的制备方法，其特征是：步骤①所述的上皮细胞培养液由1～3代上皮细胞培养过程中收集的培养液混合而成；步骤②中，上皮细胞培养液与L-DMEM体积比为1∶1，所得到的上皮细胞诱导液蛋白浓度为1500～2500μg/ml。

8.一种由骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化制备上皮细胞的方法，包括：

a)骨髓间充质干细胞的培养；

b)制备权利要求1所述的上皮细胞诱导液；

c)取骨髓间充质干细胞，用消化液在室温下消化、传代，加入b)步骤制备的上皮细胞诱导液培养，每2天用上皮细胞诱导液半量换液，诱导培养21天后，骨髓间充质干细胞分化为上皮细胞。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：步骤c)所述的骨髓间充质干细胞为第2代～第5代任意一代干细胞。

10.权利要求1所述的上皮细胞诱导液在体外定向诱导骨髓间充质干细胞向上皮细胞分化的应用。