[发明专利]一种甲状腺球蛋白和红芸豆植物红血球凝集素快速联合纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种使用共沉淀法从红芸豆中提取植物红血球凝集素单 体，同时纯化得到甲状腺球蛋白的新技术，属于生物工程技术领域。

背景技术

甲状腺球蛋白是一种糖蛋白，主要存在于哺乳动物的甲状腺组织中。由于 可以同凝集素或糖蛋白可逆结合.因此甲状腺球蛋白在生物技术领域常常用作 配体偶联到Sepharose 4B等载体，用于亲和层析分离纯化糖蛋白。甲状腺球 蛋白分子量巨大(660kD)，目前文献报道主要由分子筛方法纯化。如：Nubuo U等(Nubuo U.and Osamu T.，J Biochem.1961，50(6)：508-518)和曾仲奎吴 洽庆等(曾仲奎吴洽庆，四川大学学报(自然科学版)1993)用硫酸铵和 分子筛的方法分离出甲状腺球蛋白。这些方法耗时长，产率低，不适合工业化 大生产，因此，目前甲状腺球蛋白市场价格昂贵。

植物凝集素(lectin)是植物细胞都能够合成和分泌的、能与糖结合的蛋 白质，在细胞识别和粘着反应中起重要作用。凝集素具有一个以上同糖结合的 位点，因此能够参与细胞的识别和粘着，将不同的细胞联系起来，具有刺激外 周血淋巴细胞RNA合成和有丝分裂，促进免疫反应，使细胞凝聚，肿瘤细胞失 活，以及诱发人外周血淋巴细胞产生抗癌淋巴因子等生物学活性。植物红血球 凝集素(Phytohemagglutinin植物红血球凝集素)是凝集素中的一种，具备 单一的凝血活性，能特异性的识别特殊糖链，因而在免疫诊断方面较凝集素更 具优势单体，纯化的植物红血球凝集素可作为糖专一性探针，研究癌变细胞膜 糖链结构和细胞变异的工具，目前提取植物红血球凝集素主要是从植物凝集素 中分离得到的，且是利用亲和层析。如：Kimiko ohtani等(Kimiko ohtani，Satoaki shibata，Akira misaki.Purfication and characterization of Tora-bean(Phaseolusvulgaris)lectin[J].Biochem，1980，87：407-416)和丁邦裕等(丁 邦裕，戴美红，余健.江苏菜豆同工凝集素的分离纯化及性质研究.生物化学志 [J].1991，7(1)：25-27)利用盐析和离子交换树脂结合来进行凝集素的纯化， Tamao Endo等(Tamao Endo.Fractionation of glycoprotein-derived oligosaccharides by affinity chromatography using immobilized lectin columns[J]. Journal of ChromatographyA，1996，720：251-26)和R.Reynoso-Camacho等 (R.Reynoso-Camacho，E.Gonzalez de Mejia，G.Loarca-Pina.Purification and acute toxicity of a lectin extracted from tepary bean(Phaseolus acutifolius)[J].Food and Chemical Toxicology，2003，41：21-27)利用亲和层析纯化凝集素。红芸豆红细胞 凝集素单体的分离纯化和性质研究，成都医学院学报，2008年6月”，其中 公开的红血球凝集素单体的提取方法，具体方法为：制备植物凝集素初提取物， 再经GM-Sepharose层析、DEAE-Sepharose层析、Sephadex G 100层析，制备 植物凝集素单体；但是这些方法不能直接从原料中提取植物红血球凝集素，而 且由于采用多步层析耗时长，生产成本高，不利于大规模生产。

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种通过共沉淀法从红芸豆中提取甲状腺球 蛋白和红芸豆植物红血球凝集素单体。

本发明提供了一种分离纯化红芸豆植物红血球凝集素和甲状腺球蛋白的 方法，它是将红芸豆中提取物植物红血球凝集素粗提液与甲状腺球蛋白粗提液 混合，采用共沉淀法提取、纯化、分离，得红血球凝集素单体。

具体地，包括如下步骤：

a、制备红芸豆植物红血球凝素粗提液；

b、制备甲状腺球蛋白粗提液；

c、将红芸豆植物红血球凝素粗提液与甲状腺球蛋白粗提液按体积比为： 0.5∶1-2∶1混合，离心，取沉淀；