[发明专利]抗鳜鱼弹状病毒糖蛋白的单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及水产动物病毒单克隆抗体技术领域，更具体涉及一种抗鳜鱼弹状病毒糖蛋白的单克隆抗体，同时还涉及抗鳜鱼弹状病毒糖蛋白的单克隆抗体的制备方法，分泌抗鳜鱼弹状病毒糖蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞的融合、分离、鉴定与扩增培养，涉及抗鳜鱼弹状病毒糖蛋白的单克隆抗体对鳜鱼弹状病毒感染的免疫检测，还涉及抗鳜鱼弹状病毒糖蛋白的单克隆抗体在鳜鱼弹状病毒糖蛋白在宿主的组织或细胞中的定量和定位分析中的用途。

背景技术

鱼类弹状病毒是一类引起鱼及其他水生动物致死性和流行性病害的重要病毒病原，呈世界性分布，给淡、海水水产养殖业造成巨大的经济损失和严重威胁，现已报道的鱼类弹状病毒达十几种[Kurath和Winton，Fish Rhabdoviruses，F：221-227(Brian和Marc，Encyclopedia of Virology，第三版，2008)]。20世纪90年代开始，本实验室从患流行病的鳜鱼组织中分离鉴定出了鳜鱼弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus，SCRV)[张奇亚等，科学通报，1999，44(2)：192-195；Tao等，Aquaculture，2007，262：1-9]。进一步对鳜鱼弹状病毒的全基因组进行测序，结果揭示：鳜鱼弹状病毒的基因组为不分节段的单股负链RNA，大小为11545 bp，编码5种结构蛋白，即核蛋白(Nucleoprotein，N)、磷酸化蛋白(Phosphoprotein，P)、基质蛋白(Matrix protein，M)、糖蛋白(Glycoprotein，G)和RNA聚合酶(Polymerase，L)，序列比对显示鳜鱼弹状病毒与弹状病毒科的水疱性口炎病毒属的成员的亲缘关系最近[Tao等，Virus Research，2008，132：86-96]。

对于鱼类弹状病毒病，尚缺乏治疗药物和方法，早期检测和诊断仍是预防该病毒病传播的主要途径。鱼类弹状病毒病原的检测可以通过细胞培养、电镜观察、RT-PCR及免疫学等方法进行。其中，具有特异性强的单克隆抗体对鱼类弹状病毒病原进行检测，不仅具有快速、灵敏的优点，而且适于大规模现场检测应用。另外，在对鱼类弹状病毒的基础研究中，单克隆抗体还能用于相应病毒多肽在宿主体内或培养细胞中的表达、定位及病毒与宿主相互作用等研究。国内外虽有用单克隆抗体检测鱼类弹状病毒的报道(Dixon和Longshaw，Dis Aquat Org，2005，67：25-29；Zhou等，Viral Immunol，2006，19：637-645；Chen等，Vet ImmunolImmunopathol，2008，123：266-276)，但至今尚未见鳜鱼弹状病毒单克隆抗体相关文献与专利。因此，抗鳜鱼弹状病毒的单克隆抗体亟待研发。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种抗鳜鱼弹状病毒糖蛋白的单克隆抗体，所述的单克隆抗体是由保藏编号为CCTCC No：C200918的小鼠杂交瘤细胞株SCRV-G-1B2分泌产生。SCRV-G-1B2细胞增殖后可制备大量所需的特异抗体；SCRV-G-1B2细胞注射小鼠后，产生的小鼠腹水单抗ELISA效价为1∶10⁵；SCRV-G-1B2细胞株细胞活性高，液氮中冻存6-8个月后，仍能快速复苏并保持良好活性。

本发明的另一个目的是在于提供了一种抗鳜鱼弹状病毒糖蛋白的单克隆抗体的制备方法。在分离免疫鼠脾脏细胞之前，通过将纯化鳜鱼弹状病毒直接注射小鼠脾脏进行强化免疫，可获得活性更高、特特异性更强、数量更多的鼠脾脏淋巴细胞，以保证所获得的融合杂交瘤细胞效果更好。在所述单克隆抗体制备中，使用小鼠脾脏强化免疫技术的融合率为96.3％，阳性率达到97％。

本发明的目的还提供了一种抗鳜鱼弹状病毒糖蛋白的单克隆抗体在鳜鱼弹状病毒感染的免疫检测中的应用。

本发明又一个目的是在于提供了一种抗鳜鱼弹状病毒糖蛋白的单克隆抗体在鳜鱼弹状病毒糖蛋白在宿主的细胞中进行定量分析的应用。

本发明再一个目的是在于提供了一种抗鳜鱼弹状病毒糖蛋白的单克隆抗体在鳜鱼弹状病毒糖蛋白在宿主的组织中进行定位分析的应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：