[发明专利]一种诊断评价或测定癌症并预知所述疾病严重性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种诊断评价或测定癌症并预知所述疾病严重性的方法。具体的来讲，涉及病人尿液中人嗜中性粒细胞明胶酶相关性脂笼蛋白(NGAL)含量的测定方法。

背景技术

对于癌症病人的治疗目前没有最好的办法，提高癌症病人生存率最重要的方法就是早期的诊断。寻找癌症早期诊断的目标为防癌提供了不可磨灭的帮助。随着基因分析学和蛋白组学的发展，癌症相关分子及分子标志物的研究也随之取得了较大的进展。例如，在前列腺癌病人的血液中可以检测到前列腺特异抗原PSA，并且可以指示前列腺癌的存在，这样病人便可以通过血液检测PSA的水平来快速的检测出是否患有前列腺癌。

NGAL蛋白是1993年在中性粒细胞内首先被发现的，与炎症、胚胎发育、免疫应答、趋化作用、信号转导以及多种肿瘤的发生与发展等过程相关。近年来国内外的研究表明，NGAL蛋白在多种疾病发病过程中具有特异性表达变化的特点，使得NGAL成为检测疾病的生物标志物。

同源性分析表明，NGAL与小鼠的24p3和大鼠的neu相关lipocalin(neu-related lipocalin，NRL)具有很高的同源性。小鼠的24p3在肝脏中合成，炎症反应时上调，另外24p3也见于巨噬细胞和子宫内膜，尤其是生殖期的子宫内膜。用类固醇激素可使相应组织中的24p3水平升高，而一些生长因子和肿瘤促进因子也可以使其升高。猴病毒SV40、多瘤病毒或其他病毒感染可以刺激培养的小鼠肾细胞24p3 mRNA的表达增加7-10倍。且随着大T抗原的合成的增加而升高。因此24p3被认为是癌基因产物。这同时表明NGAL可能是人类的一种新的癌基因。

实验证明，在卵巢癌细胞系、结肠肿瘤和乳腺癌等中的NGAL的表达明显增强。免疫组化证明在肺癌组织中的NGAL强阳性，而支气管肺泡细胞癌和粘液细胞癌染色最强，NGAL在胰腺癌中会从阴性增加到强阳性。

这样，这些发现的事实为不同病期的癌症病人的快速有效诊断提供了客观可能性。作为癌症的特征分子，NGAL成为有效的临床检测工具。

发明内容

本发明提供了用于诊断或监测癌症的方法，所述方法包含以下步骤：

i)使用相关器械收集病人尿液。

ii)病人尿液与抗体接触反应。

iii)检测人NGAL的浓度，并根据浓度衡量评价癌症的严重程度。

优选通过免疫化学方法来测定NGAL水平，这种方法的例子包括但绝不限于免疫比浊法、夹心法ELISA、竞争法ELISA。

对病人尿液样本，可以用任何提供满意的分析特异性、灵敏度和精确度的方法来进行。检测实验中，使用NGAL的单克隆抗体、多克隆抗体或任何可与NGAL特异性结合的分子。结合分子首先固相化捕捉样品中的NGAL形成复合物，而另外一个标记可检测的结合分子再结合上述复合物，最后通过特定方法显示出复合物量的值从而间接反应出样品中NGAL的含量获得病情的严重性。另外可以直接利用游离的NGAL抗体或偶联乳胶颗粒以胶体形式存在的抗体与样品中的NGAL直接结合所形成的复合物引起浊度变化；用光投射强度或光散射强度表征这种变化；从人NGAL标准品的浓度与相应光散射强度或光透射强度的标准曲线查出待检标本的人NGAL的含量。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1乳胶增强免疫比浊法检测病人尿液中的NGAL含量

实现本实例的技术方案：一种检测人嗜中性粒细胞明胶酶相关性脂笼蛋白(NGAL)的免疫比浊法，用抗NGAL的多克隆抗体首先与乳胶交联，然后用交联后的乳胶溶液与待检标本的NGAL反应，所形成的复合物引起浊度变化；用光投射强度或光散射强度表征这种变化；从NGAL标准品的浓度与相应光散射强度或光投射强度的标准曲线查出待检样本的NGAL含量；其中所用的NGAL的多克隆抗体效价至少为1∶500，不含杂抗体，具有识别NGAL多种抗原决定簇；待检标本用稀释剂做1∶200-1∶1000稀释。

上述方法中，所述NGAL标准品是纯NGAL，其浓度为0.2mg/ml，先用稀释剂做1∶200倍稀释，再做倍比稀释，做成系列标准品，供作标准曲线用。

实施例2用夹心法ELISA确定病人尿液NGAL浓度