[发明专利]猪MHCⅡTA基因作为免疫相关分子标记的鉴定与应用

说明书

技术领域

本发明属于家畜分子标记制备技术领域，具体涉及一种猪MHCIITA基因作为免疫相关分子标记的鉴 定与应用。

背景技术

猪肉是我国居民最主要的动物蛋白质食物来源，家猪在畜牧业中占有举足轻重的地位。数十年来，家 猪遗传改良成效显著，但主要针对的是生产性状，即生长性状与繁殖性状等。相对于生产性状，针对猪的 健康及抵抗疾病能力的研究却较为薄弱。以高瘦肉型猪为目标的近现代育种使相关等位基因丢失或频率降 低而导致现代商业品种的体质和抗病能力急剧下降。随着集约化饲养方式的普及，猪病特别是一些呼吸系 统与繁殖系统的传染病给养猪生产带来了巨大的经济损失，疾病已成为现代养猪业的最大威胁之一，严重 制约的中国养猪业的健康发展。可喜的是，越来越多的畜牧工作者开始意识到提高猪群健康以维持稳定生 产的重要性。

面对目前养猪生产中生产性状的提高和抗病性下降的矛盾，仅仅依靠药物和疫苗既加大了养猪成本， 又给食品安全带来了隐患，因此，这需要我们寻找更加有效的方法来提高猪群的抗病能力和健康水平。在 对家畜的长期观察中人们发现，并非所有感染病原微生物的动物都发病，而且已有研究表明部分猪对引起 仔猪腹泻的肠毒性大肠杆菌K88具有天然抗性，而这些猪对疾病的抵抗是受遗传控制的。由此可知动物传 染性疾病的发生与动物本身的遗传背景是密切相关的。从长远角度来看，采用遗传学方法来提高猪群健康 水平和抗病能力是治本的策略，而筛选与鉴定猪免疫力相关基因与分子标记是这项工作的基础和关键。因 此，寻求免疫抗病基因进行育种，提高猪群先天抗病能力是当前发展猪育种工作的大势所趋。MHCIITA 基因就是一个与机体抗病和免疫力密切相关的关键基因。

MHCIITA(MHC class II transactivator)是调节主要组织相容性复合体II类分子(MHCII)的分子开关。 主要组织相容性复合体(Major Histocompatibility Complex，MHC)是与抗病性和免疫应答密切相关的一组 基因群。猪的MHC(命名为SLA)位于猪的7号染色体上，有I和II两种类型。MHC II类分子在体内主 要发挥抗原递呈作用，在诱发获得性免疫反应中起核心作用，MHCII类分子的异常表达通常会引起严重的 免疫缺陷疾病，如淋巴细胞综合征(BLS)等。与MHC II类分子相一致，仅抗原递呈细胞可以组成性表达 MHCIITA，但是其它各种细胞可以诱导表达MHCIITA。

MHCIITA在与MHCII类分子有关的免疫反应中发挥重要作用。有研究表明病原体逃脱免疫系统的途 径涉及到对MHCIITA表达的调节。比如巨细胞病毒通过改变IFN-γ信号转导途径而下调MHCIITA的表达， 这样降低了MHCII类的免疫刺激作用。小鼠巨噬细胞受到牛分枝杆菌BCG感染时，其基因产物可抑制 IFN-γ介导的STAT-1的磷酸化，导致MHCIITA和MHCII类分子的表达降低。衣原体通过使上游刺激因子 1变性而干扰了MHCIITA基因的转录。因此，MHCIITA基因在机体抵抗各种病原的过程中发挥重要作用。

目前为止，关于猪MHCIITA基因的研究很少，且没有关于其遗传多态性的相关研究报道。因此，介 于MHCIITA在机体抗病免疫反应中发挥的重要作用，申请人选择了该基因并对其进行了相关研究和免疫 性状关联分析。申请人通过克隆MHCIITA的部分序列，并利用软件对测序结果进行分析，在该基因3′UTR 区鉴定出9个SNP位点。选取了其中位于第188bp的C188-T188碱基突变位点，对其做了与免疫性状的 关联分析，同时，进一步检测了该突变在国内外6个猪血缘中的遗传多样性；从而，成功地鉴定出了一个 新的与猪免疫力相关的分子标记。

发明内容

本发明的目的在于克隆一种猪MHCIITA基因作为免疫相关分子标记，并将其应用于猪分子标记辅助 育种，以期获得较高的社会和经济效益。

本发明通过以下技术方案实现：

申请人克隆得到一种与猪免疫力相关的分子标记，它是序列表SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。在 序列表SEQ ID NO：2的第188bp处发现1个C188-T188的碱基突变，导致PvuII-RFLP多态性。

其中，克隆猪MHCIITA基因的编码区(CDS)引物对的和核苷酸序列如下：

正向引物：5′-TGGTGACTGGCACTTTCCT-3′，反向引物：5′-TGAGCATTGGGTGGGG-3′。