[发明专利]一株重组毕赤酵母菌株的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种基因工程重组微生物的应用。

背景技术

随着经济的高速发展，人民生活水平的不断提高，高品质的生活越来越受到人们的关注，这其中最重要的一条就是健康。但是经济的发展又伴随着人们饮食结构的改变，工作、生活压力的增大，运动的减少和居住生活环境的恶化等等对健康不利的因素，各种疾病特别是恶性疾病的发病率有逐年增高的趋势，其中肝癌是我国常见恶性肿瘤之一，死亡率高，在恶性肿瘤死亡顺位中仅次于胃、食道而居第三位，在部份地区的农村中则占第二位，仅次于胃癌，在我国每年死于肝癌约11万人，占全世界肝癌死亡人数的45％。为了预防和治疗这些恶性疾病，全国每年花费大量的人力和物力，但收效甚微。

据统计，全球现在有1500万-2000万人酗酒，其中10％-20％的人有不同程度的酒精性肝病。在我国，也有不少人嗜好饮酒。据报道，适量饮酒对大多数人的健康并没有损害，少量饮用酒精性饮料，如葡萄酒，对身体还有一定的好处。但是，若长期过量饮酒，特别是饮用高度酒，会使肝细胞反复发生脂肪变性、坏死和再生，最终导致肝硬化、肝癌。

另外，根据报道乙醛脱氢酶的补充可以减少心肌缺血/再灌注损伤，减少心肌细胞由于缺氧而引起的凋亡等。许多文献已经表明乙醛脱氢酶的存在对心肌细胞都有良好的保护作用。

基于以上原因，社会迫切的需要一种行之有效的解酒、保肝的保健品出现。今年来出现一些含乙醛脱氢酶的解酒药的报道，但是乙醛脱氢酶至今获得途径的狭窄，成为该类保健品的瓶颈。

发明内容

本发明的目的在于提供一株重组毕赤酵母菌株的应用。

本发明所提供的一株重组毕赤酵母菌株，为一株巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115-07ALDH2菌株，已于2009年1月6日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏号：CCTCC N0：M208266。

本发明所采用的巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115为华中农业大学生命科学技术学院赠送。

一株重组毕赤酵母菌株的应用，其特征在于为一株巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115-07ALDH2菌株应用于解酒、保肝。

一株巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115-07ALDH2菌株应用：

将一株巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115-07ALDH2菌株在BMGY培养基中培养24h，再收集菌体转入到BMMY培养基中诱导表达60h，离心(6000转/分)5分钟，取上清液加入质量浓度为250g/L的聚乙二醇PEG8000沉淀上清液中的人乙醛脱氢酶2，然后加入和上清液等体积的蒸馏水，溶解人乙醛脱氢酶2，得到含人乙醛脱氢酶2的酶液，最后采用壳聚糖来进行固定，

固定具体过程如下：

①取3.00g壳聚糖(脱乙酰度＞90％)，加入蒸馏水100mL，磁力搅拌10min，充分混匀；再加入1mL冰醋酸，磁力搅拌2h，得到壳聚糖胶液；

②在磁力搅拌的情况下，向上述50mL壳聚糖胶液中，加入10mL含人乙醛脱氢酶2的酶液(浓度为100mg/mL)，搅拌均匀后，再加入质量浓度为20mg/mL的焦磷酸钠溶液50mL，搅拌10min，静置固定化3h；得到初始固定化酶，用蒸馏水将多余的焦磷酸钠洗掉，得到固定化酶样品；

③将上述固定化酶样品用冷冻干燥机干燥，在-50℃下干燥48h至干燥完全，得到固定化酶(产品)。

所述的BMGY培养基：1％(质量含量)酵母膏，2％蛋白胨，1.34％酵母氮源碱YNB(含硫酸铵，不含氨基酸)，4×10^-5％生物素，1％甘油，100mmol/L磷酸钾缓冲液(pH为6.0)；余量为蒸馏水。

所述的BMMY培养基：1％酵母膏，2％蛋白胨，1.34％酵母氮源碱YNB(含硫酸铵，不含氨基酸)，4×10^-5％生物素，0.5％甲醇，100mmol/L磷酸钾缓冲液(pH为6.0)，余量为蒸馏水。

本发明的有益效果是：本发明所得到的一株巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115-07ALDH2菌株可应用于解酒、保肝；具有解酒、保肝的效果。

附图说明

图1是质粒pUC57-ALDH2和质粒pPIC9K酶切回收片段图。泳道1、泳道2是质粒pUC57-ALDH2酶切回收图，泳道3是质粒pPIC9K酶切回收图。

图2是大肠杆菌DH5α感受态细胞转化质粒pPIC9K-ALDH2菌液PCR图。