[发明专利]一种杠板归有效成分总黄硐的提取方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种杠板归有效成分总黄硐的提取方法，本发明还涉及杠板归有效成分总黄硐制备治疗抗疱疹病毒药物中的应用。

背景技术

杠板归系蓼科植物杠板归Polygonum perfoliatum L.的全草，始载于《万病回春》谓“四五月生至九月见霜即无，叶尖青如犁头样，藤有小刺，子圆如珠，生青熟黑”。多生于阴湿草地，路边，河岸的草丛或灌丛中，在我国南北各地均有分布。杠板归为民间较广泛使用的草药，具有清热解毒，祛湿除痹，杀虫止疡等功效，但对其抗病毒的活性成分还未见相关研究。

发明内容

本发明的要解决的技术问题是要提供一种从杠板归中提取其有效成分总黄硐的方法，本发明要解决的另一个技术问题是杠板归有效成分总黄硐在制备治疗抗疱疹病毒药物中的应用。

本发明的目的是这样实现的：一种杠板归有效成分总黄硐的提取方法，取杠板归并按固液比为1∶25分别加入浓度为75％的250ml，在80℃的恒温水浴锅中回流提取3小时，得到杠板归有效成分总黄酮。

杠板归有效成分总黄硐在制备治疗抗疱疹病毒药物中的应用。

本发明提供的杠板归有效成分总黄硐的提取方法中是采用可见光分光光度法在波长为500nm处测定杠板归总黄酮的含量，通过单因素和正交试验确定了最佳提取工艺的条件。随着提取温度的提高，黄酮的提取率呈上升趋势。但考虑到提取温度过高会对提取液中的黄酮类化合物的活性造成破坏，温度过低则不利于有效物质的溶出，影响生产效率，因此将提取温度确定为80℃。随着乙醇浓度的提高，黄酮的提取率呈上升趋势，但大于75％后随着浓度的进一步升高，黄酮提取率反而有所下降，通过单因素和正交试验确定了最佳提取工艺的条件为以75％的乙醇溶液为溶剂，固液比为1∶25，在80℃下回流3h，提取率最高，总黄酮提取率为7.589％。

本发明对杠板归有效成分总黄硐在制备治疗抗疱疹病毒药物中的应用进行了研究，认为杠板归主要通过抑制病毒增殖途径发挥抗HSV-1作用，杠板归总提物在抑制病毒增殖(TI＝27.58)和直接杀伤(TI＝13.36)上作用明显，正丁醇部位(总黄酮)在抑制病毒增殖(TI＝8.8)上作用明显，有直接杀伤病毒的作用。溶质对病毒无作用。得到杠板归主要通过抑制病毒增殖和直接杀伤病毒的途径发挥抗HSV-1作用，其主要活性成分库杠板归总黄酮的结论。

附图说明

图1是溶剂10％DMSO对细胞的毒性作用，溶剂的半数毒性浓度为0.226ug/ml。

图2是G2药物对细胞的毒性作用，正丁醇部位(G2)的半数毒性浓度为0.00297mg/ml。

图3是G3药物对细胞的毒性作用，乙酸乙酯部位(G3)半数毒性浓度为0.00104mg/ml。

图4是G4药物对细胞的毒性作用，总提部位(G4)半数毒性浓度为0.00187mg/ml。

具体实施方式

一、提取制备工艺的研究

1.1仪器

SHB-III循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂(RE52-05)；UV-2100紫外分光光度仪(上海尤尼柯公司)。

1.2试药

杠板归药材于采自湖北宜昌市郊区，经鉴定为Polygonum perfoliatum L.的干燥全草。药材原植物采集后洗净，自然风干，切碎后备用。芦丁标准品(HPLC纯度98％)；医用乙醇(纯度＞95％)；其他试剂均为国产分析纯。

2方法与结果

2.1标准曲线的绘制

准确称取芦丁标准品4.7mg，置25mL容量瓶中，加60％乙醇溶解并稀释到刻度，配制成浓度为0.188mg/mL的芦丁标准液。精密量取配制好的芦丁标准液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL，分别装入25mL容量瓶中，不足6ml的用60％乙醇补足，加5％亚硝酸钠1mL，放置6min后加入10％硝酸铝溶液1mL，放置6min，再加入4％氢氧化钠溶液10mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15min，在500nm波长处进行比色测定，以吸光度(A)为纵坐标、芦丁标准品浓度(C)为横坐标作线性回归，得方程为A＝13.333C-0.004(r＝0.9997)。

2.2样品含量测定