[发明专利]5千亿活芽胞/克枯草芽胞杆菌原粉活芽胞数的检测方法

权利要求书

1.一种5,000亿活芽胞/克枯草芽胞杆菌原粉活芽胞数的检测方法，包括下列步骤：

A、试剂、培养基的配制及平板培养基的制备：

(1)10％吐温-80溶液：移取10mL吐温-80于100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，配制成10％吐温-80溶液，121℃灭菌30min备用；

(2)生理盐水：8.5gNaCl用蒸馏水定容至1000mL，分装400mL每瓶，121℃灭菌30min备用；

(3)配制营养琼脂培养基：胰蛋白胨5g、酵母浸粉2.5g、氯化钠5g、葡萄糖1g、琼脂15g、蒸馏水1000mL、pH 6.8-7.2、121℃灭菌30min；

(4)营养琼脂培养基灭菌后降温48-52℃时，倒平板，待平板培养基凝固后，用灭菌好的牛皮纸包好，底朝上斜放在37℃恒温培养箱中培养18-22hr；

B、5,000亿活芽胞/克枯草芽胞杆菌原粉样品的预处理：

(1)按照1％的比例在无菌生理盐水中加入灭好菌的10％吐温-80溶液，混合均匀，待用；

(2)称取0.99g-1.01g的试样于中性瓶中，摇动，混合均匀；

(3)把中性瓶放在磁力搅拌器平台上，混合28-32min；在13-17min时摇动1min，再次将磁力搅拌混合13-17min；

(4)将已混合好的试样放入超声波水浴器中，共超声13-17min；

(5)在超声波处理之后，再次用匀质器：速度：6～9次挤压/秒，处理8-12min；

C、5,000亿活芽胞/克枯草芽胞杆菌原粉样品的稀释：

(1)向无菌试管分别加入4.5mL生理盐水和10％吐温-80溶液混合的稀释液，试管上标记样品号和稀释倍数的字样，操作在超净工作台中进行；

(2)吸取0.5mL已处理好的试样溶液到第1支试管中，再从第1支试管吸取0.5mL试样溶液于第2支试管，依次进行到第6支试管，稀释度至10^-8；

(3)将稀释至10^-8试样放入68-72℃水浴锅中水浴28-32min取出后冷却，然后吸取0.5mL该试管试样溶液于第7支试管，稀释度至10^-9，混匀，备用；

D、5,000亿活芽胞/克枯草芽胞杆菌原粉样品涂布及培养： 

将稀释至10^-9试样各吸取0.1mL到5个营养琼脂平板中，各平板均标上样品号、日期、稀释度，使用1支涂棒，将已放在平板中的试样涂布到全部被培养基吸收，涂布3个平板后用涂棒在空白的营养琼脂平板上来回涂布20次；换1支涂棒将两个平板中的试样涂布到全部被培养基吸收，再用涂棒在空白的营养琼脂平板上来回涂布20次，涂布完成后，将其放在37℃恒温培养箱中16hr-20hr；

E、计数：

培养16hr-20hr后，统计平板上的单菌落数，计算试样中的活菌数量。