[发明专利]变形斑沙雷氏菌及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种变形斑沙雷氏菌，同时还涉及该菌株的制备方法以及其 在防治小麦全蚀病方面的应用。

背景技术

小麦全蚀病(又称黑脚病)是由小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces graminis var tritici)侵染小麦根部引起的是一种土传病害。小麦染病后，幼苗瘦弱，分 蘖减少，成穗率降低，千粒重下降，轻者产10％～20％，重者减产50％以上， 甚至会造成绝收。麦田一染病，扩散蔓延较快，由零星发病到大面积发生一 般只需3年的间，而且发病田较难彻底根除此病。

目前，对于小麦土传病害，尚缺乏有效抗病品种，病害的防治主要通过 化学防治的方法，由于农药的大量使用，不仅导致小麦种植成本的提高，还 对环境造成危害，甚至导致抗药性菌株的出现，致使化学农药的防效降低或 者丧失。生物防治作为一种有广泛前途的植物病害的防治方法，目前已经成 为国内外研究和应用的热点，但是，由于传统生物防治是通过根际微生物及 其代谢产物对病原物的竞争、拮抗以及诱导植物产生抗病作用(Induced systemic resistance，ISR)来实现的，容易受环境条件的影响，在实际应用过程 中出现防效不稳定的现象，

植物内生细菌是指能定殖在健康植物组织内，并与植物建立了和谐关系 的一类细菌。利用定殖于小麦内部的内生细菌来进行生物防治，可以克服上 述传统生物防治的不足，有必要加强筛选对病害有较高防治效果的小麦内生 细菌，目前关于用内生细菌来防治小麦土传病害的研究中，没有任何关于变 形斑沙雷氏杆菌防治小麦全蚀病的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从拔节期健康小麦植株中分离筛选得到一株 具有防治小麦全蚀病的内生细菌——变形斑沙雷氏菌。

另外，本发明的目的还在于提供一种变形斑沙雷氏菌的制备方法。

更进一步地，本发明的目的在于提供一种该变形斑沙雷氏菌在防治小麦 全蚀病方面的应用。

为了实现上述目的，本发明的技术方案采用了一种变形斑沙雷氏菌， Serratia proteamaculans wg-2，其保藏号为CCTCC NO：M209042。

同时，本发明的技术方案还采用了一种变形斑沙雷氏菌的制备方法，包 括以下步骤：选取健康小麦，取新鲜小麦根，自来水冲洗表面，滤纸吸去水 分，经消毒、无菌水冲洗2-4次后剪小段于无菌研钵中，加入无菌磷酸缓冲 液(pH 7.0)，充分研碎；静止10-20min取上清进行稀释，取稀释液经培养 基在28-30℃培养1-2d；菌落长出后再纯化于4-6℃保存。

所述的消毒是先用75％乙醇表面消毒25-35s，再用0.1％升汞消毒10 -15min。

所述的培养基为KMB培养基，具体成分为：蛋白胨20g，甘油10.0g， K₂HPO₄1.5g，MgSO₄·7H₂O 1.5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH 7.2。

所述的培养基的具体成份为：胰蛋白胨(tryptone)5g、酵母提取物(yeast extract)2.5g、NaCl 5g，琼脂粉15g溶解于800ml去离子水中，调pH至7.5。

更进一步地，本发明的技术方案采用了一种变形斑沙雷氏菌在预防小麦 全蚀病方面的应用及在治疗小麦全蚀病方面的应用。

本发明的用于防治小麦全蚀病的菌株为变形斑沙雷氏菌Serratia proteamaculans wg-2，该菌株是从黄淮麦区，拔节期小麦(内乡182)植株 中分离得到的，短杆状，个体较小，两端钝圆，革兰氏阴性，接触酶实验阴 性，不产生芽孢，在LB平板上菌落不透明、光滑、湿润、白色、全缘，该菌 具有运动性，产生几丁质酶、铁载体等可能的生防相关因子。

本发明可以按照常规方法进行对小麦全蚀病的生物防治。将wg-2在 KMB培养基中扩大培养后，制备成一定浓度的菌悬液，以此菌悬液处理小麦 种子，将处理后的种子播种于感染了全蚀病菌的土壤，再以wg-2发酵液做一 次浇灌。20天后，统计小麦全蚀病发病情况，计算防效。

以下是本发明的变形斑沙雷氏菌Serratia proteamaculans wg-2与几种菌株 在防治小麦全蚀病的对比数据