[发明专利]甘薯商19的脱毒快繁技术及培养物质

权利要求书

1.甘薯商19的脱毒快繁方法，其具体步骤是：

(1)、分化培养：从正在生长的植株中，选择生长健壮，无病虫，具有本品种特征特性的植株，剪取带有茎尖的茎蔓，去掉可见叶，在流动的自来水中冲洗，拮干水分，在无菌室内的超净工作台上，用重量百分比为75％的酒精浸泡20秒钟，重量百分比为0.1％的升汞溶液灭菌8-12分钟，无菌水冲洗5-7遍，在60-80倍解剖镜下，利用解剖针剥离茎尖，所剥茎尖为0.1-0.3毫米，带1-2个叶原基，快速接种到分化与诱导培养基中，然后在温度26±2℃，日照时数12-14h，光照强度2200-2500LX的条件下培养，20天后重新转入分化与诱导培养基中继续培养，40-50天后培养瓶内小苗长出5-7片叶，除去病苗弱苗，其余的进行编号并快繁一次，待苗子长出7-9片叶时即可以进行病毒检测；

(2)、茎尖苗带毒检测

先目测，把带毒症状明显的茎尖苗除去，用血清学检测法对商薯19茎尖苗进行检测，去除带有对甘薯危害严重的甘薯羽状斑驳病毒、甘薯潜隐病毒、甘薯类花叶病毒的茎尖苗；

(3)、增殖培养

通过病毒检测后，不符合标准的全部淘汰，剩下的无毒苗加速快繁，在超净工作台上，将脱毒无菌苗剪成带有1-2个节间的茎段转接到继代与增殖培养基中进行增殖培养，PH 5.6-5.8，在温度26-28℃，光照12-14h/d，光照强度2000-2500lx，湿度65-70％的环境条件下进行培养，20-25天后可形成4-5个丛生芽，28-35天生长高度5cm左右，即可在同一培养基上继代繁殖，继代周期为25-28天；

(4)、生根培养

选取生长势强、健壮的无菌芽苗切成含有1-2个节间的小段，长1.0-1.5cm，转入生根培养基中，25-28天，有95％以上的植株长出3-5条0.3-3cm长的根，展开叶3-5片，待苗长至30-35d时，即可炼苗移栽，培养温度26±2℃，湿度65-75％，光照强度2200-2500LX，光照时间12-14h/d；

(5)、炼苗与移栽

练苗前首先揭开培养瓶的封口膜，练苗时间5-7天，练苗时在保证温、湿度的条件下，逐步接近自然环境，以利提高成活率，然后小心取出，用自来水冲洗净苗基部的培养基，并灭菌，然后移栽到已灭过菌的腐殖质与碎炉渣以2∶1的比例混合的基质中，前期适当遮阴并保持湿度在90％，逐步降至70-75％，15天后去掉薄膜罩，定期杀菌，7-10天一次，共计2-3次；

其中分化与诱导培养基的配比是：MS基本培养基1升、6-苄基腺嘌呤6-BA1.0-3.5mg、a-奈乙酸NAA 0.5-3.0mg、2.4-二氯苯氧乙酸2.4-D 0.2-2.5mg、玉米素ZT 0.1-0.3mg、椰汁100-200mg、蔗糖30g、琼脂6.5g；

继代与增殖培养基的配比是：MS基本培养基1升、6-苄基腺嘌呤6-BA1.0-3.0mg、a-奈乙酸NAA 0.5-2.0mg、吲哚丁酸I BA 0.2-1.5mg、玉米素ZT 0.1-0.3mg、蔗糖30g、琼脂6g；

生根培养基的配比是：1/2MS基本培养基1升、a-奈乙酸NAA 0.5-2.0mg、蔗糖20g、琼脂6g。