[发明专利]包埋玻璃化超低温保存山药种质的预培养基及其培养方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种种质保存技术，特别是一种包埋玻璃化超低温保存山药种质的预培养基及其培养方法。

背景技术：

山药既是一种深受人们喜爱的食品，又是一种药用价值很高且应用广泛的中药材，尤其怀山药，其药用价值更高。然而，对山药种质的保存技术仍沿用传统的方法，许多珍贵种质资源丢失，不能适应现在日益增长的需求量的要求。超低温保存技术是目前保存期长、品质稳定、应用成熟的一种种质保存方法。20世纪90年代出现的包埋玻璃化法超低温保存技术，综合了玻璃化法和包埋脱水法的优点，而克服了包埋干法操作繁琐及细胞内外冰晶的形成和玻璃化法的毒性。目前已在苹果、薄荷、草莓、柿、山葵、甘薯、大蒜等得到成功应用。此种方法由继代培养、低温练苗、预培养、包埋、装载和脱水处理、液氮保存、保存后化冻和洗涤及再生培养等环节组成、然而，经过试验这种方法在山药种质的保存中应用未能成功，经研究其原因之一是预培养基不适于山药种质。

发明内容：

本发明的目的是提供一种能将包埋玻璃化法超低温保存技术应用在山药种质保存的包埋玻璃化超低温保存山药种质的预培养基及其培养方法。本发明的技术解决方案是，一种包埋玻璃化超低温保存山药的预培养基，它包含有MS基本培养基，其特征在于：在MS中还加有以下两种渗透物质的任一种：①0.1mol/L甘油和0.2mol/L蔗糖；②0.2mol/L蔗糖。一种用权利要求1制成的包埋玻璃化超低温保存山药的预培养基对山药种质进行预培养的方法，包括将低温锻炼后的山药试管苗切成带芽茎段，其特征在于：将切取的带芽山药茎段放入预培养基中在4℃下恒定培养3-5天。本发明与现有技术比较具有操作简单、保存时间长和保存后再生植株遗传稳定性好的显著优点。

具体实施方式：

本发明的预培养基是MS+0.2mol/L蔗糖+0.1mol/L甘油或者MS+0.2mol/L蔗糖。

本发明的预培养方法是，将低温锻炼后的怀山药(一般山药亦可)试管苗切成1cm左右的带芽茎段，放入上述本发明的预培养基中在4℃下恒定培养3-5天。

通过对保存时间和保存后再生植株的遗传稳定性的研究发现：保存时间对材料的相对存活率和成活率均没有影响；再生植株与常温保存苗相比，株高、叶片数、芽数、茎节长、叶绿素和可溶性蛋白的含量、SOD、POD、PPO和淀粉酶的同工酶酶谱以及RAPD条带均未出现变异。