[发明专利]一种中药龙胆的质量检测方法

说明书

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及中药龙胆的质量检测方法。 

技术背景

中药龙胆是龙胆科植物条叶龙胆(Gentiana manshurica Kitag.)、龙胆(Gentiana scabra Bge.)、三花龙胆(Gentiana triflora Pall.)或坚龙胆(Gentiana rigescens Franch.)的干燥根及根茎，前三种习称“龙胆”，后一种习称“坚龙胆”。其中条叶龙胆又称东北龙胆，龙胆又名为粗糙龙胆。龙胆性寒，味苦，归肝胆经，具清热燥湿，泻肝胆火之功效，属清热燥湿药。用于湿热黄疸，阴肿阴痒，带下，湿疹瘙痒，目赤耳聋，惊风抽搐等症。龙胆为常用中药，中医取其苦寒之性，泻肝胆实火，除下焦湿热。研究发现，龙胆的根及根茎含有环烯醚萜，裂环环烯醚萜及其苷类，生物碱，黄酮，甾体，香豆素，内酯，糖及其苷类，酚性成分，微量元素，鞣质，有机酸，挥发油等挥发成分。裂环环烯醚萜及其苷类为中药龙胆最主要的药效活性成分，以龙胆苦苷为主，是保肝利胆、健胃、抗炎等药理作用的基础性成分。在临床上，龙胆是龙胆泻肝汤、泻青丸、当归龙荟丸等方剂的主药，具泻肝胆实火、清下焦 湿热之功。近年来用于健胃、抗肿瘤。龙胆在国际上龙胆亦为天然药，被收载为苦味健胃剂。现在市场上中药龙胆品种众多，而各品种之间的化学成分及含量均有差异，若化学成分和含量不能达到质量要求，势必会影响临床应用的安全性以及有效性。为确保中药使用的安全有效，对中药材进行准确可靠的质量检测是十分必要。(参考文献：YangShaoyun(杨绍云)，Wang Weiwei(王薇薇)，Li Zhiping(李志平).ChineseTraditional Herb Drugs.(中草药)，1981，12(6)：7.) 

发明内容

本发明的目的是提供一种中药龙胆的质量检测方法。该方法利用龙胆粗提物的电喷雾质谱作为指纹图谱，利用高效液相色谱法确定龙胆中裂环烯醚萜苷类化合物的含量，保证了质量检测方法的准确性和质量检测标准的先进性。 

实施本发明的技术方案如下： 

将中药龙胆粉碎过60-80目筛，称取已粉碎的龙胆50-200mg置50ml锥形瓶中，以体积百分比浓度为50％-100％的甲醇作为溶媒，加入甲醇5-20ml，超声提取1-3次，20-40min/次，超声提取温度20-50℃，过滤，合并上述提取液并浓缩至1-2ml，甲醇定容至10ml，摇匀，即为供试样品溶液； 

样品的电喷雾指纹图谱通过如下步骤得到：取50-100μL供试样品溶液，用甲醇稀释10倍后，作电喷雾质谱分析；电喷雾质谱实验条件如下：电喷雾电离源，喷雾电压3.5-5.5kV，毛细管温度180-220℃，流动注入泵进样流速2-8μl/min；扫描范围质荷比(m/z)50-2000，利用正离子电喷雾质谱确认裂环烯醚萜苷的种类，正离子条件下，在 m/z 100-1000范围内，存在m/z 379，m/z 381，m/z 395，m/z 735，m/z 805，m/z 821离子； 

高效液相色谱技术条件如下：C18色谱柱条件为150mm×4.6mm，5μm，柱温20-35℃；流动相为甲醇和水，甲醇与水体积比80∶20-30∶70，洗脱时间30-60min；紫外检测器检测波长：190-400nm；样品进样量5-20μl； 

裂环烯醚萜苷含量测定方法如下：分别精密称量1mg的标准对照品为龙胆苦苷、当药苷和当药苦苷，分别加甲醇溶解并定容至2ml容量瓶中，配成标准对照品溶液； 

高效液相色谱测定条件如下：C18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)；柱温20℃；流动相：甲醇和水，甲醇与水体积比80∶20，等度洗脱时间30min；紫外检测器检测波长：190nm。各标准对照品分别以2、4、6、8、10μl进样，测得各标准对照品的高效液相色谱峰面积，以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准对照品含量为横坐标绘制标准曲线，计算得线性回归方程； 

然后按照标准品的高效液相色谱实验条件对供试样品溶液进行测定，样品进样量为5μl，得到各标准对照品对应色谱峰的峰面积，根据标准曲线测得供试样品中龙胆苦苷、当药苷、当药苦苷的含量。