[发明专利]一种快速检测牛奶样品中布鲁氏菌的PCR方法

权利要求书

1.一种快速检测牛奶样品中布鲁氏菌的PCR试剂盒，其特征在 于：

由DNA提取液、PCR反应液、标准阳性模板、阴性质控标准品 组成；

其中，PCR反应液包括正向引物BF、反向引物BR：

正向引物BF：5′-ATCCAGGAAACCCGACTATGCCA-3′，

反向引物BR：5′-AACCGCAAAGCTCGCTCCCAAC-3′；

标准阳性模板含有布鲁氏菌高度保守基因BCSP31基因的287个 碱基的核苷酸片段构成的pMD-18重组质粒，该质粒在大肠杆菌 DH5α中增殖；

所述布鲁氏菌高度保守基因BCSP31基因的287个碱基的核苷酸片 段的序列为：

5′-atccaggaaacccgactatgccattcgccgcctgatgcagggttttgggctgcgtttttaatcgtttcag tcggctctggcggcgcttgtcggcaagcgattgtattctttgggaaaatccagaataatggaatgcggtg gttgacaatcggcctcaagcttcctatggttttcggcataatctatgcgggaagaggactggtattatgaaa ttcggaagcaaaatccgtcgcttggctgttgcggcggtggcgggcgcgattgcgttgggagcgagcttt gcggtt-3′。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征是：

PCR反应液：由正向引物BF和反向引物BR，含Mg²⁺的10×PCR  Buffer，dNTPs及无菌双蒸水组成。

3.权利要求1所述的试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

1)DNA提取液包括如下组分：含有0.1M Tris-HCl和0.1M EDTA  pH 8.8的10×TE，5％NP-40和0.5％Tween-20；

2)PCR反应液：由正向引物BF和反向引物BR，含Mg²⁺的10×PCR  Buffer，dNTPs及无菌双蒸水组成；

3)标准阳性模板：含有布鲁氏菌高度保守基因BCSP31基因287 个碱基的核苷酸片段构成的pMD-18重组质粒；

所述布鲁氏菌高度保守基因BCSP31基因的287个碱基的核苷酸片 段的序列为：

5′-atccaggaaacccgactatgccattcgccgcctgatgcagggttttgggctgcgtttttaatcg tttcagtcggctctggcggcgcttgtcggcaagcgattgtattctttgggaaaatccagaataatggaatgc ggtggttgacaatcggcctcaagcttcctatggttttcggcataatctatgcgggaagaggactggtattat gaaattcggaagcaaaatccgtcgcttggctgttgcggcggtggcgggcgcgattgcgttgggagcga gctttgcggtt-3′

4)布鲁氏菌BCSP31基因特异性引物序列：

正向引物BF：5′-ATCCAGGAAACCCGACTATGCCA-3′，

反向引物BR：5′-AACCGCAAAGCTCGCTCCCAAC-3′；

5)阴性质控标准品：阴性质控标准品为无菌双蒸水。