[发明专利]抑癌基因编码蛋白序列及其融合表达载体

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是对DNA损伤敏感的抑癌基因的蛋白核心功能区域及其融合表达载体。 

背景技术

肿瘤细胞的特征是基因组不稳定性(genomic instability)，DNA损伤修复异常和细胞周期调控异常是造成基因组不稳定性的原因。肿瘤细胞的恶性转化是以锚定非依赖性生长(anchor-independent growth)为特征。 

以基因组DNA为研究对象的微阵列比较基因组杂交(microarray-based comparative genomic hybridization，Array-CGH)技术是目前国际上发现肿瘤相关新基因的强有力手段。Array-CGH技术将覆盖全基因组且已知顺序的DNA克隆做成微阵列，代替传统CGH检测中将中期染色体作为杂交靶，大大提高了检测DNA拷贝数异常位点的分辨率；再分别提取肿瘤组织和正常组织的基因组DNA，用cy3和cy5荧光染料分别标记肿瘤组织和正常组织的DNA，进行杂交检测，在杂交系统中加入Cot1-DNA用于抑制基因组中重复序列的干扰，并用自动化的扫描仪分析杂交靶上荧光信号的相对强弱，最后用自动化分析软件进行定量分析。Array-CGH不仅使检测染色体异常的分辨率提高，而且还可以确定肿瘤相关基因并提供精确的定位。 

对DNA损伤敏感的基因(FATS)，编码一个在进化上极其保守的蛋白，在多种癌细胞中发生缺失及表达异常，是一个抑癌基因。 

发明内容

本发明是为进一步研究FATS抑癌分子机制，以及为FATS在肿瘤基因治疗中的应用，而提供一段抑癌基因编码蛋白序列及其融合表达载体。 

本发明通过比较基因组杂交技术(CGH)和以细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome，BAC)为基础的DNA芯片技术，系统分析肿瘤基因组中DNA拷贝数的异常变化，在DNA缺失区域确认一个命名为FATS(Fragile-site Associated Tumor Suppressor)的基因。微阵列CGH分析结果表明：FATS最大的编码外显子区在肿瘤基因组中的缺失频率比下游外显子区高7倍，并以开放读码框架(open reading frame，ORF)的形式存在，并将其命名为mini-FATS，显示mini-FATS核酸序列是FATS基因发挥抑癌功能的关键区域。 

ORF编码蛋白序列如下： 

MISPVVISRLIDEKKSMENGAILPQAIAQPQLCPTKPALARRDGVSMHRRFALSPDRLGILTPSDDQGLE 

TEPLSTGDNLGKGSHSGFSSITITARRVGPPASSLVWDTFRDPLCPKCKAKDALFQEPPVLAGDAHLCQH 

NRPFTCTESPSNGSVEGMKVFQAHSRLSARQDYWVTHTNDNEDSFSSDNSPSRKVPLVFSSCVHFRVSQQ 

CPNAIYYLDKSLSVPLERPQIASPKMHRSVLSLSLRCSSHQLTADGVDSSANGEPISTALSQELSEGKQD 

LLGPQWGQPQGGHWKESPALVPVHLGSGTCPRTGSPPLENVKFADVGRNQVPVRKEKEDHATCTSSSHTN 

QLSIHIPGWSYR 

一段抑癌基因编码蛋白序列，其是由对DNA损伤敏感抑癌基因最大外显子区编码，蛋白产物具有体外和体内抗肿瘤活性，其编码蛋白见序列表1。 

所述抑癌基因编码蛋白序列，该序列由对DNA损伤敏感抑癌基因中的微型抑癌基因区域编码，蛋白产物具有体外和体内抗肿瘤活性。 

所述抑癌基因编码蛋白序列，其具有的抗肿瘤活性包括抑制癌细胞体外生长，抑制裸鼠移植瘤的生长。 

一种抑癌基因编码蛋白序列的融合表达载体，其是由微型对DNA损伤敏感抑癌基因的核酸序列与pcDNA3载体连接而成，该融合表达载体转染肿瘤细胞后能抑制肿瘤细胞的恶性转化和扩增。 

所述的抑癌基因编码蛋白序列的融合表达载体，该融合表达载体转染后，抑制Hela癌细胞在裸鼠异体移植瘤模型中的生长。