[发明专利]αs1-酪蛋白来源的阿片肽(AOPP)及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药领域，更具体的说，是涉及一种αs1-酪蛋白来源的阿片肽(AOPP)。

背景技术

乳是外源性阿片肽的通常来源，一般把来自于酪蛋白的阿片肽，叫酪啡肽(Casomorphin，CM)，来自于乳清蛋白的阿片肽，叫乳啡肽(Lactorphins)。1979年Brantl等人最早报道从喂食了牛乳酪蛋白酶解物的豚鼠的回肠纵行肌毛细血管中发现了具有类吗啡活性的短肽，他们首先从酶解的β-酪蛋白水解产物中分离到一个七肽物质(Tyr-Pro-Phe-Pro-Gly-Pro-Ile)为β-酪蛋白第60-66氨基酸残基片断，命名为β-酪啡肽-7(β-CM-7)，与μ受体具有良好的亲和力，并呈现出阿片肽类所具有的特征，如依赖性、呼吸抑制性等。随后人工合成了β-CM-7和它的同系物β-CM-6、β-CM-5、β-CM-4，并证明β-CM-5在豚鼠回肠试验中具有最强的阿片活性。Mei sel等则从饲喂牛酪蛋白的微型猪空肠食糜中分离到一个阿片肽，对应β-酪蛋白第60～70氨基酸残基片断Tyr-Pro-Phe-Pro-Gly-Pro-Ile-Pro-Asn-Ser-Leu，称为β-CM-11，是β-CM-7的前体。一般来讲，从含3个氨基酸到含7个氨基酸的小肽均称为β-酪啡肽，7个以上则称β-酪啡肽前体。研究结果表明：对于所有不同数量氨基酸残基的酪啡肽，要保持其生物活性，N-末端Tyr-Pro-Phe-氨基酸结构不能改变，这种结构是其与阿片受体结合不可缺少的，所有类型的β-酪啡肽都是β-CM-11的C-末端丢掉一或多个氨基酸残基形成的。β-酪啡肽由于脯氨酸的含量高，可避免被胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶降解。但当它被肠吸收后，会被肠粘膜上的二肽基-二肽酶IV(DPIV)降解成X-Pro(N-末端)二肽类物质。后来又发现来源于人β-酪蛋白的阿片活性肽有f51-57、f51-54、f51-55、f41-44等4个氨基酸片断，其中f51-57排列顺序与牛的β-CM-7相似，只是在第4、5位上不同(Tyr-Pro-Phe-Val-Gln-Pro-Ile)，其阿片活性比牛β-CM-7低4-5倍。

Loukas等1983年报道牛乳α_s1-酪蛋白的三个水解片断f90-95、f90-96、f91-96同样具有阿片活性，而且均为δ受体的选择性配体。同年Ermisch等通过给鼠注射标记的β-CM-5后发现这种阿片肽可以很轻松地通过血脑屏障，从而与脑内的阿片受体结合。据Chabance报道，成年人在大量饮用牛奶后，在其胃肠道内能检测到多种酪蛋白水解产生的酪啡肽片断，我们认为这些阿片肽可以直接作用于消化道中的阿片肽受体以影响胃肠道的运动或者作为胃肠道激素的外源性调节剂，也可能在小肠刷状缘降解成更小的疏水性阿片肽，穿过肠粘膜进入外周血液，再透过血脑屏障与中枢阿片受体结合，从而发挥其镇痛、呼吸抑制、促进睡眠、调节行为、刺激摄食等作用。

2003年Perpetuo等用胰蛋白酶水解γ-酪蛋白又发现了一种含有8个氨基酸残基的新阿片活性肽Tyr-Pro-Val-Glu-Pro-Phe-Thr-Glu，对应γ-酪蛋白的第114-121氨基酸序列。2005年韩飞等利用基因重组毕赤酵母生产出一种短肽，含10个氨基酸残基，序列为Tyr-Pro-Phe-Pro-Gly-Pro-Ile-Arg-Tyr-Gly，在β-CM-7的基础上又增加了3个氨基酸，经检测具有明显的阿片活性。同年，Liang J等报道从硬虱中分离得到一种阿片肽，序列为Leu-Val-Val-Tyr-Pro-Trp-Thr-Lys-Met，但因这种物质与此前从哺乳动物血色素中提取的阿片肽hemorphin有很大的序列相似性，而硬虱又是一种以吸食血液为生的动物，所以该肽是硬虱本身产生还是在吸食血液时从宿主获得有待进一步研究。另外，α-乳清蛋白含有一个阿片活性序列(Tyr-Gly-Leu-Phe)，为第50-53氨基酸片断，称为α-啡肽(α-Lactorphin)。与此相似，β-乳球蛋白的第102-105氨基酸片断(Tyr-Leu-Leu-Phe)同样具有阿片活性，称为β-乳啡肽(β-Lactorphin)。来自于牛血清白蛋白(BSA)的399-404片断(Tyr-Gly-Phe-Gln-Asn-Ala)也是一种阿片肽，称为Serorphin。