[发明专利]αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特异性抗体及试剂盒和试纸条无效
| 申请号： | 200910068653.2 | 申请日： | 2009-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN101531716A | 公开（公告）日： | 2009-09-16 |
| 发明（设计）人： | 庞广昌;张涛;赵越;艾丽萍;方素云;胡娲;李丹 | 申请（专利权）人： | 天津商业大学 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C07K1/30;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/558 |
| 代理公司： | 天津市三利专利商标代理有限公司 | 代理人： | 肖莉丽 |
| 地址： | 300134*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | sub s1 蛋白 特异性 抗体 试剂盒 试纸 | ||
1、一种兔抗αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特异性抗体，其特征在于，该αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特异性抗体通过下述方法制备：
(1)动物的饲养与处理：新西兰大白兔，预养一周后，观察无异样，采集兔耳中央动脉血样2～3ml，将收集的血样分离血清，作为抗血清检测时的阴性对照血清；
(2)初次免疫：兔子在免疫前进行编号；取αs1-酪蛋白标准样品用生理盐水溶解，配成浓度为2mg/ml的αs1-酪蛋白溶液，取κ-酪蛋白标准样品用生理盐水溶解，配成浓度为2mg/ml的κ-酪蛋白溶液；将得到的αs1-酪蛋白溶液与完全福氏佐剂按照体积比为1:1的比例混合得到αs1-酪蛋白溶液；将得到的κ-酪蛋白溶液与完全福氏佐剂按照体积比为1:1的比例混合得到κ-酪蛋白混合溶液，用两只注射器分别抽取αs1-酪蛋白溶液和κ-酪蛋白溶液相对反复抽送直至两种酪蛋白混合溶液完全乳化得到免疫注射液，对编号的新西兰大白兔进行腹部皮下5点免疫注射，每点0.2ml；
(3)加强免疫：对编号的新西兰大白兔初次免疫21天后，进行第一次加强免疫，第一次加强免疫的方法为：分别用步骤2中制备的浓度为2mg/ml的αs1-酪蛋白溶液和浓度为2mg/ml的κ-酪蛋白溶液采用耳缘静脉注射免疫，免疫剂量分别为1ml/只；以后每隔7天加强免疫1次，免疫剂量与免疫方法与第一次加强免疫相同，共进行4次加强免疫；在每次加强免疫后的7～10天抽取静脉血，分离血清，用ELISA法测定抗血清的效价。
(4)当用ELISA法测定抗血清的效价达到1:2700以上时分别经心脏采血收集αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白的多克隆抗血清；
(5)用硫酸氨沉淀法对αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白多克隆抗血清进行分离纯化，得到αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特异性抗体。
2、一种含有权利要求1所述的αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特异性抗体的酶联免疫吸附试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中检测样品的特异性蛋白含量的检测抗体为兔抗αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特异性抗体，标记酶为过氧化物酶，标记抗体为羊抗兔抗体，其中兔抗αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特异性抗体通过下述方法制备：
(1)动物的饲养与处理：新西兰大白兔，预养一周后，观察无异样，采集兔耳中央动脉血样2～3ml，将收集的血样分离血清，作为抗血清检测时的阴性对照血清；
(2)初次免疫：兔子在免疫前进行编号；取αs1-酪蛋白标准样品用生理盐水溶解，配成浓度为2mg/ml的αs1-酪蛋白溶液，取κ-酪蛋白标准样品用生理盐水溶解，配成浓度为2mg/ml的κ-酪蛋白溶液；将得到的αs1-酪蛋白溶液与完全福氏佐剂按照体积比为1:1的比例混合得到αs1-酪蛋白溶液；将得到的κ-酪蛋白溶液与完全福氏佐剂按照体积比为1:1的比例混合得到κ-酪蛋白溶液，用两只注射器分别抽取αs1-酪蛋白混合溶液和κ-酪蛋白混合溶液相对反复抽送直至两种酪蛋白混合溶液完全乳化得到免疫注射液，对编号的新西兰大白兔进行腹部皮下5点免疫注射，每点0.2ml；
(3)加强免疫：对编号的新西兰大白兔初次免疫21天后，进行第一次加强免疫，第一次加强免疫的方法为：分别用步骤2中制备的浓度为2mg/ml的αs1-酪蛋白溶液和浓度为2mg/ml的κ-酪蛋白溶液采用耳缘静脉注射免疫，免疫剂量分别为1ml/只；以后每隔7天加强免疫1次，免疫剂量与免疫方法与第一次加强免疫相同，共进行4次加强免疫；在每次加强免疫后的7～10天抽取静脉血，分离血清，用ELISA法测定抗血清的效价；
(4)当用ELISA法测定抗血清的效价达到1:2700以上时分别经心脏采血收集αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白的多克隆抗血清；
(5)用硫酸氨沉淀法对αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白多克隆抗血清进行分离纯化，得到αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特异性抗体。
3、一种含有权利要求1所述的αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特异性抗体的金标免疫层析试纸条，包括吸水滤纸、醋酸纤维膜、胶体金结合垫、玻璃纤维，其特征在于：所述胶体金结合垫吸附有αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特异性抗体，所述αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特异性抗体通过下述方法制备：
(1)动物的饲养与处理：新西兰大白兔，预养一周后，观察无异样，采集兔耳中央动脉血样2～3ml，将收集的血样分离血清，作为抗血清检测时的阴性对照血清；
(2)初次免疫：兔子在免疫前进行编号；取αs1-酪蛋白标准样品用生理盐水溶解，配成浓度为2mg/ml的αs1-酪蛋白溶液，取κ-酪蛋白标准样品用生理盐水溶解，配成浓度为2mg/ml的κ-酪蛋白溶液；将得到的αs1-酪蛋白溶液与完全福氏佐剂按照体积比为1:1的比例混合得到αs1-酪蛋白溶液；将得到的κ-酪蛋白溶液与完全福氏佐剂按照体积比为1:1的比例混合得到κ-酪蛋白溶液，用两只注射器分别抽取αs1-酪蛋白混合溶液和κ-酪蛋白混合溶液相对反复抽送直至两种酪蛋白混合溶液完全乳化得到免疫注射液，对编号的新西兰大白兔进行腹部皮下5点免疫注射，每点0.2ml；
(3)加强免疫：对编号的新西兰大白兔初次免疫21天后，进行第一次加强免疫，第一次加强免疫的方法为：分别用步骤2中制备的浓度为2mg/ml的αs1-酪蛋白溶液和浓度为2mg/ml的κ-酪蛋白溶液采用耳缘静脉注射免疫，免疫剂量分别为1ml/只；以后每隔7天加强免疫1次，免疫剂量与免疫方法与第一次加强免疫相同，共进行4次加强免疫；在每次加强免疫后的7～10天抽取静脉血，分离血清，用ELISA法测定抗血清的效价；
(4)当用ELISA法测定抗血清的效价达到1:2700以上时分别经心脏采血收集αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白的多克隆抗血清；
(5)用硫酸氨沉淀法对αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白多克隆抗血清进行分离纯化，得到αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特异性抗体。
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