[发明专利]一种抗猪流感转移因子

说明书

技术领域

本发明属于兽药领域，具体地说，是涉及一种抗猪流感转移因子的制备工艺。

背景技术

猪流感病毒(Swine influenza virus，SIV)一年四季可感染不同日龄、性别和品种的猪，引起猪流感。猪流感是一种急性、热性、高度接触性的呼吸道传染病。其临床上以突发、高热、流泪、咳嗽、呼吸困难衰竭和死亡为特征。虽然SIV引起的死亡率很低，病猪也可迅速康复，但会导致猪只增重受阻，肉料比降低，生产性能下降，对养猪业造成极大的危害。

1918年美国首次报道了本病的发生，1930年Shope从患病猪中分离到该病毒。迄今为止，欧、美、亚、非、澳等世界各大洲均有本病的发生和流行。SI能引起猪的高发病率(几乎100％)和低病死率(病死率≤1％)。此病的发生可使患病猪生产性能下降，推迟上市；还可引起呼吸道细菌和病毒继发或混合感染，使疫情更为严重，造成猪只死亡。猪流感除了经典的H1N1和H3N2亚型外，其它亚型的病毒在北美猪群中也有流行和爆发，并且H4N6和H1N1的禽流感病毒突破了种间障碍，传染给了猪；而猪流感感染人并导致人死亡的报道也时有发生。猪在禽-猪-人的流感种间传播过程中，起着中间宿主及多重宿主的作用。猪是人源、禽源和猪源流感病毒的惟一共同易感宿主，它能将流感病毒传播给人或鸟类。通过监测SI的动态变化可以预测人流感的发展趋势。因此，研究SI具有更加深远的公共卫生学意义。由于本病的流行和危害日益严重，因此对SIV的研究已成为国内外兽医界、医学界和微生物学界的热点之一。

尽管目前已经有一些抗猪流感的药品或制剂，但是由于现有药品制剂的针对性不强，疗效有限，而且，治疗性制剂多是在发病后才应用的，不能起预防作用。首先对于猪流感的易感猪群，每年定期对猪接种疫苗也是控制猪流感的有效措施，美国和欧洲都有H1N1亚型和H3N2亚型的商品疫苗；其次应增强营养或药物干预，提高自身免疫力；再者通过药物提高机体抵抗力或调节免疫力也是一种预防猪流感的有效方法，转移因子可起到此作用。

转移因子(TF，Transfer Factor)是T淋巴细胞释放的一种能够转移致敏信息的低分子量多肽-核苷酸复合物，它能将供体的某种特定的细胞免疫功能特异地转移给受体正常的淋巴细胞，参与机体的免疫反应，提高受体机体的细胞免疫功能，抵抗真菌、病毒等非细菌性感染；同时促进B淋巴细胞的抗体分泌作用，能够诱导细胞释放干扰素和白介素，从而增强受体的免疫功能。

目前已报道的转移因子的提取方法有关于非特异性转移因子的制备方法也有关于特异性转移因子的制备方法。例如，中国发明专利申请“制备转移因子的工艺方法-全滤法”(专利申请号：200310118439.6)则公开了采用压滤、超滤、纳滤几种方法连续过滤的制备工艺。另一份中国发明专利申请“制备转移因子的工艺方法-加热法”(专利申请号：200410039444.2)是由同一申请人在前一份申请的基础上加上加热处理的步骤，仍然是连续采用多种过滤法的制备工艺。关于特异性转移因子的专利如：“一种抗鸡新城疫病毒转移因子的制备方法”(专利申请号：200810053541.5)则公开了用鸡新城疫病毒免疫猪，用组织捣碎机、冻融、离心、超滤法的制备工艺。还有一份专利“抗流感病毒转移因子的制备”(专利申请号：200610035059.X)则公开了用流感疫苗免疫猪，组织捣碎机捣碎、低温冻融、离心、中空纤维管超过滤的制备工艺。上述专利申请的内容是对破碎后的组织经冷冻离心后直接进行过滤提取，组织捣碎机存在细胞破碎不完全的缺陷，有些工艺繁琐，时间较长，对产物的活性损失也较大，因此得率很难提高。

因此，为了在最大限度保持活性、提高得率的基础上提取转移因子，同时为了适用于工业化生产的需求，需要一种简单、实用、经济、高效的转移因子的提取方法。因此，我们采用高压均质机快速破碎细胞，能更有效的保持转移因子活性在破碎期间不降低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术中存在的不足，提供一种天然高效纯生物活性物质抗猪流感病毒转移因子的制备方法。

本发明抗猪流感病毒转移因子的制备方法，按照以下步骤进行：

(1)制备病毒抗原：将猪流感病毒接种于MDBK细胞，加入1％的胰蛋白酶，37℃培养24～72h。消化细胞，-20℃反复冻融3次，超声波破壁，10000rpm离心5min，弃去沉淀收集上清液，甲醛灭活4℃，过滤除菌，分装，-70℃保存。