[发明专利]一种树枝状有机荧光染料生物探针及其制备方法

权利要求书

1.一种树枝状荧光染料生物探针，其特征是：该生物探针结构包括在一个 壳聚寡糖分子上连接1至15个树枝状荧光染料分子，同时再与一个叶酸分 子结合形成的探针，该生物探针制备方法包括有以下步骤：

1)树枝状荧光染料的制备

①将摩尔比为1∶3的2，2-二甲氧基乙胺及丙烯酸甲酯，置于甲醇溶剂 中，搅拌均匀，在温度为35～50℃的条件下反应两天，用柱层析分离，得 到甲基酯化合物1；

②取摩尔比为1∶3的上述甲基酯化合物1及乙二胺溶于甲醇溶剂，置 于反应瓶中搅拌，氮气保护下，避光反应2～3天，用油泵抽滤除去过量的 乙二胺，得到一代树枝状化合物2；产物直接用于下一步反应；

③取摩尔比为1∶2的上述一代树枝状化合物2及荧光染料，溶于甲醇 溶剂，在氮气保护下，避光反应2～3天，析出红色针状晶体，得到一代树 枝状荧光染料；

重复一次上述①、②步骤的化学反应，得到二代树枝状化合物；二代 树枝状化合物与荧光染料反应可得到二代树枝状荧光染料；

2)壳聚寡糖-树枝状荧光染料的制备

①取适量树枝状荧光染料固体溶于摩尔比为0.03∶1的三氟醋酸和盐酸 溶液中，室温搅拌，室温搅拌1天后，将搅拌的混合物旋蒸，干燥彻底后， 得到醛基树枝状荧光染料；

②将80～100mg聚氨基多糖溶于含有适量冰醋酸水溶液中，向其中加入 上述2)中①步骤制得的醛基树枝状荧光染料，得到混合物；向该混合物中 加入25～30mL甲醇进行稀释，并室温搅拌充分后，加入100～120mg氰 基硼氢化钠，并继续搅拌1天；

③经上述②步骤反应后的混合液用100～150mL的饱和碳酸氢钠溶液和 丙酮处理，得到沉淀后的沉淀物通过过滤收集，将收集到的沉淀物分散在 5～10mL的1mol/L的氢氧化钾水溶液中，渗析2～3天，在-8～-15℃温度 下冻干，得到壳聚寡糖-树枝状荧光染料；

3)叶酸-壳聚寡糖-树枝状荧光染料探针的制备

将上述2)制备的壳聚寡糖-树枝状荧光染料的干品与叶酸按摩尔比为 1∶1溶解于二甲基亚砜溶液中，于室温下搅拌反应10小时后加入乙醚，产 生沉淀物，经过滤所得到的沉淀物用乙醚洗涤后于25～35℃下真空干燥， 即得叶酸-可壳寡糖-树枝状化荧光染料探针干品。

2.根据权利1要求所述树枝状荧光染料生物探针，其特征是：所述树枝 状荧光染料分子是由一个树枝状化合物分子与2～8个荧光染料连接而成。

3.根据权利1要求所述树枝状荧光染料生物探针，其特征是：所述壳聚 寡糖分子的分子量为195～6000。

4.根据权利1要求所述树枝状荧光染料生物探针，其特征是：所述壳聚 寡糖分子的分子量为200～2000。

5.根据权利要求1所述的树枝状荧光染料生物探针，其特征是：所述 荧光染料的简式为：TO-COOH，CY₃-COOH。