[发明专利]一种从人脐带血CD34+细胞扩增巨核祖细胞的方法

权利要求书

1.一种从人脐带血CD34⁺细胞扩增巨核祖细胞的方法，包括以下步骤：

(1)分离人脐带血单个核细胞，分选CD34⁺细胞，检测分选细胞的纯度；

(2)分离培养人骨髓间充质干细胞，并对其进行鉴定；

(3)用完全培养基重悬接种骨髓间充质干细胞，待细胞生长至细胞汇合 程度为80％-90％时，照射剂量为8-12Gy照射细胞，将CD34⁺细胞重悬于含TPO 浓度为20-30ng/mL的无血清培养基中，接种到照射过的骨髓间充质干细胞 上进行培养，所述CD34⁺细胞的接种密度为(4-6)×10⁵细胞/T-25培养瓶， 在含TPO的无血清培养基中培养7天。

2.根据权利要求1所述的从人脐带血CD34⁺细胞扩增巨核祖细胞的方法， 其特征在于，所述完全培养基组成是：体积比DMEM/F12∶MCDB201＝6∶4， 体积百分比浓度2％胎牛血清，体积百分比浓度1％胰岛素-转铁蛋白-硒复合 物ITS，10^-8mol/L地塞米松，10ng/mL表皮生长因子EGF，2ng/mL成纤 维细胞生长因子bFGF，100U/mL青/链霉素和2mmol/L谷氨酰胺。

3.根据权利要求1所述的从人脐带血CD34⁺细胞扩增巨核祖细胞的方法， 其特征在于，所述完全培养基组成是α-MEM，体积百分比浓度20％胎牛血清， 4ng/mL成纤维细胞生长因子bFGF。

4.根据权利要求1所述的从人脐带血CD34⁺细胞扩增巨核祖细胞的方法， 其特征在于，所述完全培养基组成是DMEM，体积百分比浓度10％V/V胎牛血 清和50U/mL青/链霉素。