[发明专利]莲藕中儿茶素类小分子的提取方法及其应用

权利要求书

1.一种莲藕中儿茶素类小分子的提取方法，其特征在于该小分子活性成分通过水浸提、大孔树脂吸附、葡聚糖凝胶过滤，得到两种纯化产物没食子儿茶素和儿茶素；经过下述步骤：

(1)取新鲜莲藕，粉碎，去离子水4℃浸泡过夜，过滤除去残渣，5000rpm离心10min取上清旋转蒸发去多余的水分，-45℃冷冻干燥得到粗提物L；

(2)将粗提物L溶于去离子水中，上样于大孔吸附树脂，洗脱，先用去离子水洗去杂质L1，再用30％的乙醇洗脱得到活性总产物L2，柱子用90％乙醇洗去杂质L3；

(3)得到的样品L2冷冻干燥后称取上样于1.2×80cm的葡聚糖凝胶柱LH-20，洗脱，先用去离子水和乙醇依次洗去杂质L2a～L2d，再用乙醇洗脱，通过测量OD₂₈₀得到三个洗脱峰，分别命名为L2e、L2f和L2g，收集第二个峰，为抗氧化活性总产物L2f；

(4)L2f冷冻干燥后用制备型HPLC的C18柱，以水和甲醇混合液洗脱，洗脱速度为3ml/min，洗去杂质L2f-1后，收集得到两个抗氧化活性纯品峰，命名为L2f-2，鉴定为没食子儿茶素，以及L2f-3，鉴定为儿茶素。

2.按照权利要求1所述的莲藕中儿茶素类小分子的提取方法，其特征在于，步骤(2)中使用1.5×35cm的弱极性大孔吸附树脂NKA柱，仅用水和30％乙醇从粗提物L中一步分离出活性总产物L2。

3.按照权利要求1所述的莲藕中儿茶素类小分子的提取方法，其特征在于，步骤(3)中使用1.2×80cm的葡聚糖凝胶柱LH-20，仅用水和不同浓度乙醇对活性总产物进行分离，用60％的乙醇有效纯化得到抗氧化活性总产物L2f。

4.按照权利要求1所述的莲藕中儿茶素类小分子的提取方法，其特征在于，步骤(4)中，仅用水和甲醇在C18反向柱上用HPLC法纯化出单一活性成分，甲醇与水的体积比例为3∶7。