[发明专利]兽药青霉素G降解物苄青霉噻唑酸人工抗原及其特异性抗体

权利要求书

1.兽药青霉素G降解物苄青霉噻唑酸人工抗原和抗体其特征在于使用分子式为

的(2S，5R，6R)-3，3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3，2，0]庚烷-2-甲酸作为半抗原与钥孔血蓝蛋白连接合成人工抗原，与辣根过氧化物酶连接合成酶标抗原，其中人工抗原再经过免疫新西兰大白兔，取血，分离出抗血清纯化制得抗体；

2.权利要求1所述的兽药青霉素G降解物苄青霉噻唑酸半抗原的制备方法，其特征在于是用下述步骤制得：取(2S，5R，6R)-3，3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3，2，0]庚烷-2-甲酸钾盐1.500g，加入4.0ml 1M盐酸，得到半抗原(2S，5R，6R)-3，3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3，2，0]庚烷-2-甲酸白色固体，双蒸水洗涤并干燥即可得到半抗原；

3.权利要求1所述的兽药青霉素G降解物苄青霉噻唑酸人工抗原的制备方法，其特征在于是用下述步骤制得：取权利要求2所得白色固体0.5000g溶于2ml四氢呋喃中，加入0.1500gN-羟基琥珀酰亚胺和0.5000gN，N-二环己基碳二亚胺，在22-25℃下，搅拌反应过夜，然后放于4℃冰箱内18小时，离心除去沉淀，将上层活化酯液加入到pH 7.0溶有10mg钥孔血蓝蛋白的2mlPBS溶液中，经搅拌后于4℃下反应5小时，将反应液装入透析袋，4℃下、在pH 7.4的PBS中透析三天即可得到人工抗原；

4.权利要求1所述的兽药青霉素G降解物苄青霉噻唑酸酶标抗原的制备方法，其特征在于是用下述步骤制得：取权利要求2所合成的半抗原1.9mg溶于2ml二甲基甲酰胺配成溶液A，0.54mg辣根过氧化物酶溶于2ml pH 7.4的0.2mol/L磷酸缓冲液中配成溶液B，然后在冰浴下将溶液A缓慢的加入溶液B中，经搅拌后在4℃下反应过夜，最后将反应液置入透析袋中，在4℃下用pH7.4的0.2mol/L磷酸缓冲液透析三天即可得到酶标抗原，用于显色反应；

5.权利要求1所述的兽药青霉素G降解物苄青霉噻唑酸抗体的制备方法，其特征在于是用下述步骤制得：

免疫动物选用雌性新西兰大白兔，免疫方法采用皮下和肌肉注射法，初免后进行四次加强免疫，加强免疫分别于初次免疫后2周、4周和6周后免疫三次，此后间隔一个月，进行第五次免疫，9天后由兔子的耳缘静脉取血，进行效价检测，具体做法是：

初次免疫：取1mg按照权利要求3所述方法合成的人工抗原溶于0.9％的NaCl溶液和弗氏完全佐剂等体积所配制的溶液中，进行动物免疫；

加强免疫：用0.5mg上述人工抗原溶于0.9％的NaCl溶液和弗氏不完全佐剂等体积所配制的溶液，进行动物免疫；

抗体纯化：定时监测动物抗体效价，当抗体对一定的包被抗原达到适宜效价时，采集血液，并离心获得抗血清，使用G-Sepharose蛋白亲和层析柱对抗血清进行纯化，获得抗兽药青霉素G降解物苄青霉噻唑酸的特异性抗体。