[发明专利]一种大量产生β-聚苹果酸的诱变菌株出芽短梗霉TKPM00006及其培养方法

权利要求书

1.一种大量产生β-聚苹果酸的诱变菌株出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)TKPM00006。

2.根据权利要求1所述的一种大量产生β-聚苹果酸的诱变菌株出芽短梗霉TKPM10017，其特征在于：所述诱变菌株TKPM00006是以从我国宁夏回族自治区银川市王太堡果园土壤中筛选出的β-聚苹果酸生产菌TKPM10017的基础上采用多组复合诱变技术选育获得的。

3.根据权利要求1所述的一种大量产生β-聚苹果酸的诱变菌株出芽短梗霉TKPM00006，其特征在于所述的诱变处理方法为：

(1)选择生长良好的β-聚苹果酸生产菌株TKPM10017斜面菌种，用无菌生理盐水洗下孢子，制做10⁶个/mL的孢子悬浮液，于30W紫外灯下，30cm处，分别照射1、2、3、4、5、6、7、8min，将菌悬液梯度稀释涂平板，避光培养，计算致死率；

(2)根据(1)致死率选择高、中、低三个不同剂量的照射时间分别对菌株TKPM00006的孢子悬浮液进行紫外照射处理；

(3)然后把(2)三个不同照射时间的菌悬液混合均匀，梯度稀释涂平板，避光培养；

(4)将(3)中的混合均匀的诱变菌株混合液10％接种量接种到以琥珀酸为唯一碳源的发酵培养基中培养；

(5)将(4)中的种子液以10％接种量接种到以柠檬酸为唯一碳源的发酵培养基中培养；

(6)将(5)中的种子液以10％接种量接种到以醋酸为唯一碳源的发酵培养基中培养；

(7)取(6)中的种子液接种到含CaCO₃的固体培养基平板上培养，筛选培 养基中菌落大湿润、色泽黑亮、透明圈明显的菌株，即得高产聚苹果酸诱变菌株

4.根据权利要求1所述一种大量产生β-聚苹果酸的诱变菌株出芽短梗霉TKPM00006及其培养方法，其特征在于菌株的特征为：

(1)菌体形态：主要为酵母样形态，细胞椭圆形，大小均匀，数个菌体可连成链状，芽分生孢子。

(2)菌落形态：最初粘稠，乳白色，很快转变为淡绿色，最终为黑色。菌落质地粘稠湿润，色泽黑亮，菌落边缘呈些微的根状。

(3)培养特征：25℃，180～200r/m下振荡培养7～12d，发酵液颜色稳定为乳黄色，不产黑色素。

(4)可以利用的碳源：葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、琥珀酸、柠檬酸其中之一。

(5)可以利用的氮源：丁二酸铵、硝酸钠、硫酸铵、硝酸铵、氯化铵及玉米浸提液。

上述氮源可单独使用也可复合使用。

(6)可以分别以琥珀酸、柠檬酸、醋酸为唯一碳源进行生长，并生长良好；

5.根据权利要求1所述一种大量产生β-聚苹果酸的诱变菌株出芽短梗霉TKPM00006及其培养方法，其特征在于其培养方法为：

(1)菌种活化：将出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)TKPM00006转接至PDA斜面培养基，于25℃恒温培养3～5d；

(2)种子培养：选取生长良好的斜面种子用无菌生理盐水洗下孢子，制备孢子浓度约10⁶个/mL的孢子悬浮液，按10％(v/v)接种量接种到种子培养基中，于25℃，200r/m下培养2～3d，制得种子液；

(3)发酵培养：将(2)中的种子培养液以8～10％(v/v)接种量接种到发酵培 养基中，于25℃，200r/m下振荡培养7～12d。