[发明专利]一种产紫杉醇的内生真菌

说明书

技术领域

本发明涉及一种产紫杉醇的真菌。

恶性肿瘤严重地威胁着人类的健康，而且癌症是目前人类疾病中仅次于心脑血管疾患的第二大死因。

紫杉醇是从红豆杉属植物中提取出来的具有多种抗肿瘤疗效的二萜生物碱类药物。由于红豆杉(又名紫杉)是珍稀树种，生长速度缓慢，并且其生物学特性对生态环境要求较高，天然更新能力差，所以种群数量极为有限，属濒危保护植物，资源十分有限，因此国内外学者都在积极地研究开发紫杉醇的新药源。

微生物发酵生产是降低成本、大量获取紫杉醇的最理想方法。1993年美国蒙塔那州立大学化学家Andrea Stierle和植物病理学家Gary Strobel在蒙塔那西北部国家冰川公园的短叶红豆杉中分离到一株内生真菌Taxomycesandreanae，在Stierle等的工作一经发表，美国细胞克隆公司就出价100万美元支持蒙塔那州立大学的这项研究。由于紫杉醇巨大的医用价值，致使国内外的学者纷纷加入产紫杉醇微生物的研究，但是目前分离得到的可用于紫杉醇微生物发酵的菌株依然屈指可数，难以满足市场和研究的需要。

本发明的目的是为了提供一种新的产紫杉醇的内生真菌，增加可用于紫杉醇微生物发酵的菌株数量。

本发明产紫杉醇的内生真菌HD86-9(Aspergillus niger var.taxi HD86-9)属于黑曲霉紫杉变种(Aspergillusniger var.taxi D.P.Zhou，K.Zhao et W.X.Ping，var.nov)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2006年12月25日，保藏号为CCTCC NO：M 206137。

本发明产紫杉醇的内生真菌HD86-9采用现有常规发酵方法和发酵条件进行产紫杉醇发酵，发酵液中紫杉醇产量为273.46μg/L。

本发明产紫杉醇的内生真菌HD86-9经形态学、18S rDNA序列和ITS分析为黑曲霉紫杉变种(Aspergillus niger var.taxi D.P.Zhou，K.Zhao et W.X.Ping，var.nov)，属于新种。本发明不仅增加了一种产紫杉醇的内生真菌，而且为将来产紫杉醇微生物的基因改造，奠定了物质基础。

本发明产紫杉醇的内生真菌HD86-9(黑曲霉紫杉变种HD86-9Aspergillusniger var.taxi HD86-9)属于黑曲霉紫杉变种(Aspergillus niger var.taxi D.P.Zhou，K.Zhao et W.X.Ping，var.nov)，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是武汉大学，保藏日期为2006年12月25日，保藏号为CCTCC NO：M 206137。

附图说明

图1是产紫杉醇的内生真菌HD86-9菌落形态图；图2是产紫杉醇的内生真菌HD86-9分生孢子头的光学显微镜观察图(×1000倍)；图3是紫杉醇的内生真菌HD86-9分生孢子头的电子显微镜观察图；图4是产紫杉醇的内生真菌HD86-9分生孢子的扫描电子显微镜观察图(×5000倍)；图5是产紫杉醇的内生真菌HD86-9与Genbank中收录的相近菌株的18S rDNA所构建的系统发育树；图6是产紫杉醇的内生真菌HD86-9与Genbank中收录的相近菌株的ITS区(包括5.8S rDNA)所构建的系统发育树。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式产紫杉醇的内生真菌HD86-9(Aspergillusniger var.taxi HD86-9)属于黑曲霉紫杉变种(Aspergillus niger var.taxi D.P.Zhou，K.Zhao et W.X.Ping，var.nov)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2006年12月25日，保藏号为CCTCC NO：M 206137。

产紫杉醇的内生真菌HD86-9经18S rDNA序列比对(NCBI数据库)与曲霉属Aspergillus内各种之间有极高的同源性，同源性为98％以上，因此确认产紫杉醇的内生真菌HD86-9在进化地位上与曲霉属Aspergillus的亲缘关系较近。

产紫杉醇的内生真菌HD86-9与Genbank中收录的相近菌株的18S rDNA 所构建的系统发育树如图5所示。产紫杉醇的内生真菌HD86-9与Genbank中收录的相近菌株的ITS区(包括5.8S rDNA)所构建的系统发育树如图6所示。