[发明专利]一种青杨天牛中肠总RNA的提取方法

权利要求书

1、一种青杨天牛中肠总RNA的提取方法，其特征在于青杨天牛中肠总RNA的提取方法按以下步骤实现：一、将500～700μL的2×CTAB缓冲液与0.5～1.0mg的聚乙烯聚吡咯烷酮加入到1.5mL的Eppendorf离心管中混匀，在液氮环境中，将青杨天牛中肠研磨后加入到Eppendorf离心管中，混匀；二、将Eppendorf离心管置于温度为55～65℃的水浴10min；三、将500μL～700μL的氯仿/异戊醇加入到Eppendorf离心管中，在离心速度为10000～13000r/min的条件下，离心处理5min；四、取离心上清液并放入新Eppendorf离心管后，重复步骤三；五、取步骤四离心后上清液并放入另一个新Eppendorf离心管中，然后加入体积为500～700μL、摩尔浓度为5mol/L的LiCl溶液，在温度为-4℃的条件下静置沉淀15min，而后在离心速度为10000～13000r/min的条件下，离心处理5min；六、弃掉上清液再用质量浓度为75％的乙醇清洗沉淀，而后离心处理30s；七、弃掉步骤六的上清液，然后将乙醇蒸发后加入40μL的无菌水，即可提取出青杨天牛中肠总RNA；其中步骤三中氯仿/异戊醇中氯仿与异戊醇按体积比24∶1的体积比混合；步骤二水浴过程中震荡2～3次/min。

2、根据权利要求1所述的一种青杨天牛中肠总RNA的提取方法，其特征在于步骤一中2×CTAB缓冲液中Tris-HCl的浓度为100mmol/L、EDTA的为20mmol/L、NaCl的浓度为1.4mol/L、CTAB的质量分数为2％～3％、β-巯基乙醇的体积分数为0.4％和聚乙烯聚吡咯烷酮的质量分数为1％。

3、根据权利要求1或2所述的一种青杨天牛中肠总RNA的提取方法，其特征在于步骤一中将600μL的2×CTAB缓冲液与0.7mg的聚乙烯聚吡咯烷酮加入到1.5mL的Eppendorf离心管中混匀。

4、根据权利要求3所述的一种青杨天牛中肠总RNA的提取方法，其特征在于步骤二中将Eppendorf离心管置于温度为60℃的水浴中。

5、根据权利要求1、2或4所述的一种青杨天牛中肠总RNA的提取方法，其特征在于步骤三中离心速度为12000r/min。