[发明专利]一种小麦酯酶生物传感器的制备方法

权利要求书

1、一种小麦酯酶生物传感器的制备方法，其特征在于小麦酯酶生物传感器的制备方法的步骤如下：一、小麦酯酶的提取：1、小麦经粉碎过40目筛后，准确称量各10.00g，置于100mL锥形瓶中，分别加入蒸馏水，一定浓度的盐溶液各30mL，摇床中震荡提取，之后在4000r/min的速度离心20min，上清液过滤后测酶活，选择出最佳提取溶剂。二、纯化：1、脱盐将硫酸铵分级盐析后，Tris-Hcl(0.07mol/l，pH＝8)溶解的酶液装入透析袋中，对蒸馏水透析48h，并用BaCl₂溶液检测透析袋外溶液，直至透析袋外溶液与BaCl₂溶液无沉淀生成。2、使用SephadexG-100凝胶层析柱(2.5cm×60cm)，洗脱液为缓冲液，以一定的流速每管5ml进行收集，测定每管酶液比活力，检测时做三个平行样。三、小麦酯酶固定化：将去离子水与一定量的硅酸酯类化合物按照一定比例混合(R值)，加入25μLHCl，120mL甘油溶液(75％)和400mL聚乙烯醇(PVA)溶液(5％)，超声30min。之后吸取80μL溶胶，加入150μL一定浓度的TritonX-100和162μL一定浓度的PEG-400溶液，漩涡振荡20min即得到溶胶。将小麦酯酶以30mL/g的比例溶解于一定pH值的缓冲溶液中，磁力搅拌一定时间。吸取酶液加入到杂化溶胶中，旋涡振荡10min。吸取100μL的混合溶胶均匀涂布于载玻片上，于4℃干燥36h，即得到固定化后的小麦酯酶。使用前，将其在pH 6.5的磷酸盐缓冲溶液中浸泡10min，再用O型圈将该酶膜固定在球型精密型酸度计玻璃电极表面，即制成小麦酯酶生物传感器。

2、根据权利要求1所述的一种小麦酯酶生物传感器的制备方法，其特征在于步骤一中，小麦酯酶的提取，采用0.15mol/LNaCl溶液，摇床中震荡提取温度为30～50℃。

3、根据权利要求1所述的一种小麦酯酶生物传感器的制备方法，其特征在于步骤二中使用SephadexG-100凝胶层析柱纯化，洗脱液为0.1～0.2mol/L的磷酸盐缓冲液，流速0.1～0.5mL/min。

4、根据权利要求1所述的一种小麦酯酶生物传感器的制备方法，其特征在于步骤三中所采用的硅酸盐为TEOS，TritonX-100浓度为5％～10％，固定化酶反应缓冲液为pH为6.0～7.0磷酸盐缓冲液，磁力搅拌20～50min。