[发明专利]植物乳杆菌及其所产的可抑制革兰氏阴性菌的细菌素

权利要求书

1.一株植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）KLDS1.0391，其特征是：已于2009年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.3151。

2.根据权利要求1所述的植物乳杆菌KLDS1.0391，其特征是：从内蒙古传统乳制品“焦克”中分离得到，在MRS培养基上，菌落为乳白色圆形，中间隆起，边缘整齐，菌体两端钝圆、短小直杆，菌体大小0.4～0.7μm×2～3μm，为无芽孢革兰氏阳性杆菌，API50CHL糖醇发酵试验、16S rRNA序列同源性分析试验和recA基因多重PCR方法鉴定该菌为植物乳杆菌。

3.一种根据权利要求1或2所述的植物乳杆菌所产的可抑制革兰氏阴性菌的细菌素的制备方法，其特征是：以所述的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）KLDS1.0391为生产菌株，采用改良MRS培养基，进行发酵、纯化后用MODIA-TOF质谱测定得到植物乳杆菌细菌素的分子量为2180Da，所述的改良MRS培养基由胰蛋白胨、蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖、Tween-80、硫酸锰、乙酸钠、柠檬酸氢二氨、硫酸镁、K₂HPO₄·3H₂O、蒸馏水组成，其质量百分含量为胰蛋白胨 0.5%、蛋白胨 0.5%、酵母提取物 0.5%、葡萄糖 2%、Tween-80 0.1%、硫酸锰 0.025%、乙酸钠 0.5%、柠檬酸氢二氨 0.2%、硫酸镁0.058%、K₂HPO₄·3H₂O 0.2%、其余为蒸馏水。

4.根据权利要求3所述的植物乳杆菌所产的可抑制革兰氏阴性菌的细菌素的制备方法，其特征是：所述的发酵条件为发酵温度30℃，恒pH 5.0，发酵时间24h。

5.根据权利要求3或4所述的植物乳杆菌所产的可抑制革兰氏阴性菌的细菌素的制备方法，其特征是：所述的纯化按以下步骤进行：将权利要求3或4所述的发酵得到的发酵液离心，取上清液，向所述的上清液中加入饱和硫酸铵，至硫酸铵饱和度为70%，4℃搅拌过夜，离心取沉淀得到含有细菌素的沉淀物；将该沉淀物复溶后首先用Hiload 26/60 superdex 75 prep grade凝胶层析柱层析，所述层析条件为: 缓冲液为pH5.0的0.05ml/L乙酸钠和0.1mol/L的氯化钠混合液，流速3ml/min，90min-96min出现的蛋白峰为细菌素活性峰；将该细菌素活性峰收集液冻干浓缩后用SOURCE 5RPC ST 4.6/150反相色谱柱进一步纯化，所述反向层析条件为：缓冲液A为5%的乙腈水溶液加入0.1%的三氟乙酸，洗脱缓冲液B为90%乙腈水溶液加入0.1%的三氟乙酸，线性梯度洗脱，34.5min～35min出现的蛋白峰为细菌素活性峰；将该细菌素活性峰用截流分子量为1000Da的透析袋透析即得到植物乳杆菌细菌素。