[发明专利]一种新的制备复方脑蛋白水解物的方法

说明书

1、技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种新的制备复方脑蛋白水解物的方法。

2、背景技术

脑蛋白水解物最早由奥地利EBEWE药厂以Cerebrolysin为商品名出售。脑蛋白水解物是是无蛋白质的标准化器官特异性氨基酸混合物的水溶液，其中含有多种人体必需的氨基酸、非必需氨基酸、活性多肽、唾液酸等，可用于颅脑外伤、脑血管病后遗症伴有记忆减退及注意力集中障碍，对于治疗器质性脑性精神综合症、脑血管代偿不足，神经衰竭状态，幼儿脑发育不全，癫痫中风、脑炎、脑震荡等具有良好的功效。

脑蛋白水解物中，游离氨基酸、活性多肽和唾液酸对脑功能障碍的恢复起着不可忽视的作用，但是现有的制备方法得到的脑蛋白水解物中游离氨基酸含量很低，尤其是游离氨基酸的含量非常低，达不到国家规定标准。

3、发明内容

本发明采用纳滤技术提供一种从哺乳动物脑组织中制备的复方脑蛋白水解物，使用该技术制备的复方脑蛋白水解物中唾液酸的含量较高、含天然的游离氨基酸较低，通过补加外源性注射用L-氨基酸，其很大优点在于通过血脑屏障并确保疗效，对于提高脑蛋白水解物的质量及质量可控性、保证脑蛋白水解物的安全性和有效性、扩大临床应用具有重要的意义。

本发明的技术方案如下：

一种从哺乳动物脑组织中制备脑蛋白水解物的方法，包括如下步骤：

(1)胃酶液水解：取新鲜冷冻的哺乳动物脑组织，加纯化水或注射用水匀浆，匀浆液加入胃酶液搅拌均匀，水解，水解完毕加热微沸，过滤，得胃酶水解液；

(2)胰酶水解：胃酶水解液，加入胰酶搅拌均匀，水解，过滤，得脑蛋白水解物粗提液；

(3)除碱性蛋白；

(4)超滤分离；

(5)纳虑浓缩；

(6)检查细菌内毒素，得脑蛋白水解物精制品。

本发明脑蛋白水解物的制备方法，优选为：

(1)胃酶液水解：取新鲜冷冻的哺乳动物脑组织，缓化，按照1∶1～2的比例加纯化水或注射用水，胶体磨匀浆，匀浆液加热80～90℃，保温10～20min，降温至35～40℃，调pH值为2.5～3.5，加入胃酶液搅拌均匀，37～45℃水解12～18h，水解完毕，加热微沸20min，滤布过滤，得胃酶水解液；

(2)胰酶水解：胃酶水解液调节pH值7.5～8.5，胰酶(按原料1％加入)加入激活剂，0.04mol/LCaCl₂室温放置1小时加入胃酶水解液中，再用5mol/L NaOH调节pH值为7.5-8.0，45～55℃水解4h，水解完毕，调节pH值为4.0～5.0，按原料总量加入1％活性炭100℃加热20min，用滤布过滤，得脑蛋白水解物粗提液；

(3)除碱性蛋白：取脑蛋白水解物粗提液，调节pH值为9.0～10.0，加热80～90℃，保温10min，降温30℃以下，用滤纸过滤，得滤液；

(4)超滤分离：将(3)中所得滤液调pH值为6.5～7.5，用10000分子量的超滤柱超滤，超滤液冷冻48h；

(5)纳滤浓缩、活性炭处理：将(4)中所得冷冻的超滤液缓化，用0.8μm滤膜过滤，除去溶液中脂肪蛋白及杂蛋白，过滤液纳滤，纳滤液用6mol/LLHcl调pH值为4.0～5.0，并加入0.1～0.4％活性炭(w/w)，充分搅拌下100℃保温20～30min，降温30℃以下，0.45μm微孔滤膜过滤，滤液取样，检测折光率、氨基酸。

(6)补加注射用氨基酸：按折光率稀释纳滤液，补加注射用氨基酸，调整折光率、氨基酸至质量标准规定。

(7)超滤、检查细菌内毒素：将(6)中所得滤液调整pH值为7.0～7.5，再经10000分子量的超滤柱超滤，超滤液取样检查细菌内毒素，合格后，得复方脑蛋白水解物精制品。

3.复方脑蛋白水解物制备

处方：