[发明专利]一种应用原生动物纤毛虫降解石油的方法

权利要求书

1.一种应用原生动物纤毛虫降解石油的方法，其特征包括如下步骤：

A、从环境中分离纯化四膜虫种群：从油污染的水域或土壤中采集原 生动物群落，实验室内用麦粒培养液扩群，操作步骤为：显微镜下吸取 一只四膜虫(Tetrahymena sp.)，用麦粒培养液扩大培养，获得四膜虫 的单一种群；

B、纤毛虫种群的驯化：上述分离纯化的四膜虫种群培养液中加入重 量比例为0.5％原油，恒温摇床振荡培养，驯化3-5天；

C、驯化后四膜虫种群对原油的降解：

实验组在无机盐培养基中加入石油，将石油在培养基中的浓度设置 成低、中、高三个梯度，重量体积比分别为0.25％、0.50％、1.00％，每 一梯度设三到四个平行，然后加入等量400-600个虫体/ml的处于对数 生长期的四膜虫以及等量麦粒培养液，以麦粒培养液中自然繁殖的细菌 和培养液中溶解的营养成分作为四膜虫的食物；

对照组中加入等量麦粒培养液作为对照，每组设三个平行；

D、绘制四膜虫种群生长曲线：每隔12小时进行取样观察，并对四 膜虫进行计数，观察四膜虫的生长状况，绘制其种群生长曲线；

E、培养7天后测定对照组和实验组原油含量的变化，计算原油降解 率。

2.根据权利要求1所述的应用原生动物纤毛虫降解石油的方法，其 特征在于：步骤A所述的麦粒培养液是：用5克麦粒加水1000毫升，煮 到麦粒裂开，放24小时后，取其液汁。

3.根据权利要求1所述的应用原生动物纤毛虫降解石油的方法，其 特征在于：步骤B所述的恒温摇床振荡培养条件是：转速200转，培养 温度30℃。

4.根据权利要求1所述的应用原生动物纤毛虫降解石油的方法， 其特征在于：步骤C所述的无机盐培养基组成是：

5.根据权利要求1所述的应用原生动物纤毛虫降解石油的方法，其 特征在于：步骤E所述的原油含量的测定包括：

培养7天后用5mL正己烷冲洗锥形瓶，倒入分液漏斗中，反复冲洗 两遍，充分振荡后静止5min，将下层液体放出，上层倒入25mL容量瓶 中，将下层再萃取一遍，也导入容量瓶中，定容，待测；

标准曲线的绘制：称取5瓶每瓶0.1500g原油，分别溶于15mL正己 烷中，倒入25mL容量瓶中，定容；

分别取2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5、20.0、22.5mL 定容至25mL，待测；

在波长252nm用紫外分光光度计测吸光值，绘制标准曲线。

6.根据权利要求1所述的应用原生动物纤毛虫降解石油的方法，其 特征在于：步骤E所述的原油降解率的计算包括：

原油降解率＝(原油加入重量-原油降解后剩余重量)/原油重量×100％

其中：原油加入重量是在加入时称量，为已知；

原油降解后剩余重量由分光光度计测定吸光值后求出。