[发明专利]一种固态机械发酵生产木聚糖酶方法

权利要求书

1.一种固态机械发酵生产木聚糖酶方法，其特征在于，它包括菌种培育、制备种子悬浮液、固态发酵、干燥和粉碎工艺，各工序按如下步骤进行：

a.菌种培育：出发菌株采用黑曲霉菌，采用平板透明圈及测酶活力的方法，从待测菌株中选出生产良好且产酶活力高的菌株；

b.配制培养基

斜面培养基：采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基/PDA培养基；

固体发酵培养基的配制，原料采用麸皮、玉米芯粉、(NH₄)₂SO₄、MgSO₄.7H₂O、K₂HPO₄以及水，各原料按质量单位份计为：麸皮80；玉米芯20；(NH₄)₂SO₄ 1.5；MgSO₄.7H₂O 0.15；K₂HPO₄ 0.2；水100～200；pH为5.0。

C.灭菌器灭菌、物料输送至固体发酵器中

木聚糖酶的生产首先在灭菌器内进行灭菌，将清洗后空消的灭菌器内放底水50升，搅拌，投入培养基物料后锁紧罐盖，通入空气，将罐压升至1.3-1.6kg/cm²，温度120-125℃时保持40分钟，降温至80℃以下；

灭菌后的物料由无菌管道输送到固体发酵器中，搅拌，使物料均匀摊铺于筛盘表面，风冷，降温，温度达到28～30℃；

d.接种

物料达到工艺要求温度后，停止通风，将种液喷洒到物料表面，经筛盘翻搅，物料全面均匀接触种液，停止翻搅；利用摊刮出料机构使物料平整摊铺在筛盘表面，使物料温度一致、发酵菌体生长一致；

e.静止培养、发酵

随时监测发酵品温，观察生长情况；控制发酵器内温度在28～30℃；喷洒补水保持物料含水量在60％左右；在生长旺盛期，生物热高时启动筛盘、翻搅工作，降低品温。

f.干燥、粉碎

达到工艺生长要求，发酵结束，打开出料门，转动筛盘，启动出料机构，使物料从出料门均匀排出；发酵后的物料进行干燥，使含水量低于8％；干燥后的物料进行粉碎，粉碎粒径在2毫米。

2.根据权利要求1所述的固态机械发酵生产木聚糖酶方法，其特征在于，在菌种培育工序，将选出的菌株进行诱变育种：

a.以筛选出来的高产菌株为出发菌株，在生长良好的纯种斜面中加入10ml无菌水，洗下孢子，移入装有玻璃珠和190m无菌水的三角瓶中，震荡，将孢子充分散开，用脱脂棉过滤至另一无菌三角瓶中，用血球计数板计数，依次稀释，调整孢子浓度为10⁶个/ml；

b.诱变处理：取10ml孢子悬液于φ90培养皿中，置于诱变箱的磁力搅拌器上，照射时间分别为0.05分钟、1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、6分钟、8分钟，各取1ml处理液经稀释后，以每平板10-12菌落为宜，置于平皿中；

C.倾注法分离：取5种浓度稀释度的孢子悬液各0.5ml进行分离，分别置于平皿中，待培养基冷至45-50℃，迅速注入平皿，摇匀，以使菌落分散；

d.长出菌落以后，将单个菌落分别挑到斜面上；

e.将各斜面菌株利用摇瓶液体发酵后，测其酶活力，选出产酶活力高的菌株即为所需生产菌种。

3.根据权利要求2所述的固态机械发酵生产木聚糖酶方法，其特征在于，所述灭菌后的物料输送到固体发酵器中发酵时，其接种量选择为10％。

4.根据权利要求3所述的固态机械发酵生产木聚糖酶方法，其特征在于，所述灭菌后的物料输送到固体发酵器中发酵时，其发酵温度选择为28℃。

5.根据权利要求4所述的固态机械发酵生产木聚糖酶方法，其特征在于，所述灭菌后的物料输送到固体发酵器中发酵时，物料层厚度选择为20-25cm。