[发明专利]一种抑制肿瘤细胞增殖的药物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抑制肿瘤细胞增殖的药物及其应用。

背景技术

在正常的哺乳动物细胞中，抑癌蛋白p53主要通过泛素连接酶E3和26S蛋白 酶体降解途径而维持在较低的水平。当细胞面对癌基因激活、DNA损伤等应激信 号时，抑癌蛋白p53的降解会被抑制，p53的量会迅速上升，转录激活功能被活化， 诱导下游靶基因激活，进而引起细胞周期阻滞、细胞凋亡或DNA损伤修复等应激 反应。研究表明，p53在蛋白水平的变化与其功能的发挥有很大的关系。因此，p53 泛素化降解通路对p53功能的调节十分重要。

MDM2是一种重要的负责p53泛素化修饰的泛素连接酶E3。同时mdm2也是 p53转录激活的下游靶基因，在p53的调节中形成一个严谨的负反馈调节机制。遗 传学研究证明，MDM2在p53的调节中十分重要，MDM2功能的缺失可以挽救因 p53失活而导致的胚胎致死。

细胞的很多应激反应都是通过影响MDM2-p53通路来稳定p53。比如，在面对 癌基因激活的情况下，p14ARF可以通过抑制MDM2泛素连接酶活性的方式来上调 p53。另外有一大类定位于核仁的蛋白也能影响该通路，包括核糖体蛋白L5、L11、 L23和S7，早幼粒细胞白血病蛋白(PML)和核仁磷酸蛋白(NPM1)。

核糖体蛋白参与p53的调节作用主要发生在核糖体应激的情况下，比如低浓度 的放线菌素D、血清饥饿、5-氟-尿嘧啶或霉酚酸处理。核糖体应激主要是通过抑制 rRNA的合成来引起核仁中的核糖体解离，从而释放出小分子蛋白。另外，位于线 粒体的核糖体蛋白L41(MRPL41)，可以稳定p53，并促进p53转移到线粒体，进而 引起细胞凋亡。也有研究证明，在DNA损伤时，核糖体蛋白RPL26可与p53 mRNA 的5’非翻译区相结合，在翻译水平调节p53。

至今为止，尚无RPL26直接调控MDM2，通过影响肿瘤抑制分子p53的活性 抑制肿瘤细胞增殖的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一类抑制肿瘤细胞增殖的多肽。

本发明所提供的抑制肿瘤细胞增殖的多肽，是包括核糖体蛋白RPL26的自氨基 末端第46-100位氨基酸残基的最长为145个氨基酸残基的片段。

上述多肽的氨基酸序列具体如序列表中序列2、序列3或序列5所示。

上述多肽可用于制备抑制肿瘤细胞增殖的药物。

本发明的另一个目的是提供一种抑制肿瘤细胞增殖的药物。

本发明所提供的抑制肿瘤细胞增殖的药物，它的活性成分是上述多肽。

所述肿瘤细胞具体可为骨肉瘤细胞。

本发明通过报告基因实验、免疫印迹检测、免疫共沉淀和细胞增殖检测等实验， 证实RPL26可与MDM2和p53形成复合体，RPL26与MDM2的结合，可以明显 降低MDM2的泛素连接酶活性，进而提高p53的稳定性和转录激活活性。RPL26 的过表达可以显著抑制肿瘤细胞增殖，这一作用与p53的活性有关。RPL26可以辅 助用于临床上治疗肿瘤，具有重要的意义。

附图说明

图1为U2-OS细胞中，RPL26可以提高p53的转录激活活性。

图2为H1299细胞中，外源RPL26可以阻滞MDM2介导的p53降解。

图3为MEF(p53^-/-/mdm2^-/-)细胞中，RPL26通过影响MDM2来增强p53的转录 激活活性和稳定性。

图4为MEF(p53^-/-/mdm2^-/-)细胞中，MDM2存在时，敲低RPL26可以进一步降 低p53的表达。

图5为H1299细胞中，RPL26阻滞MDM2介导的p53降解和MDM2降解。

图6为MEF(p53^-/-/mdm2^-/-)细胞中，RPL26可以影响MDM2和p53的半衰期。

图7为MEF(p53^-/-/mdm2^-/-)细胞中，各个RPL26缺失突变体对MDM2和p53 的影响。

图8为HEK293细胞中，RPL26、MDM2和p53三者可形成复合物。

图9为U2-OS细胞中，RPL26可以抑制细胞增殖。

图10为H1299细胞中，RPL26对细胞增殖无显著影响。