[发明专利]纤维蛋白封闭剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种可以止血、可做培养基、可用于药物载体和替代皮肤、骨 骼、软骨、神经等组织的纤维蛋白胶及其制备方法，更具体地涉及一种纤维蛋 白封闭剂及其制备方法。

背景技术

纤维蛋白封闭剂(Fibrin Sealant，简称FS)，它的作用机制是模拟血液凝固 的最后阶段，在凝血酶和钙离子的作用下使纤维蛋白原转化为纤维蛋白单体， 进一步聚合转变为纤维蛋白网，并在第XIII因子的作用下，形成交联稳定的 纤维蛋白网，从而发挥其止血功效。近几十年来，FS的用途已不再局限于止 血、促进愈合、封闭缺损、防止粘连这四大功能，而是借助于FS的粘合性， 可用于肌腱内缝合肌健损伤，借助于FS的可塑性，可用于骨质缺损的塑形修 复。将FS作为缓释载体与某些镇痛药物、化疗药物等结合，可以显著延长药 物的镇痛、抗癌作用时间。

现今生产的纤维蛋白封闭剂主要含两种试剂，试剂I主要含高浓度的纤维 蛋白、凝血因子XIII；试剂II主要含凝血酶和氯化钙。当试剂I和试剂II溶 解混合后，凝血酶能水解纤维蛋白原，使之转化为纤维蛋白单体。单体由于负 电荷减少，自发聚合成不稳定的可溶性纤维蛋白多聚体。同时，在Ca²⁺存在 的条件下，凝血酶能激活因子XIII。因子XIII能催化某些肽链间的残基共价 结合，最后形成稳定的不溶性纤维蛋白多聚体。多聚体形成后，通过以下机理 发挥止血、封闭、粘合作用：1、多聚体交织成网状，能网住红细胞及血小板， 形成血凝块，发挥止血作用；2、不溶性纤维蛋白多聚体形成后，其机械强度 显著增强，可粘合组织及封闭缺损，同时能刺激毛细血管内皮细胞及成纤维细 胞生长，并以纤维蛋白网为支架形成肉芽组织，从而促进伤口愈合；3、在创 面形成的膜状凝胶能防止坏死组织细胞内溶酶体酶向细胞外泄漏，避免周围组 织进一步受损，同时因减少创面出血，减轻机化程度，能防止组织粘连。

80年代初在欧洲国家出现了商业化产品。1998年正式收载进入欧州药典。 制造商们通过严格的血浆筛选，采用多种病毒灭活方法如加热、UV照射、S/D 灭活等处理，以提高其产品的安全性。1998年奥地利的ImmunoAG公司制造 的纤维蛋白胶——Tisseel/Tissucol是第一个被美国FDA批准上市的生物 胶产品。目前在国外已上市的纤维蛋白封闭剂产品还有Beriplast P；Hemaseel、 Biocol、Quix2il等。国外生产纤维蛋白胶的制造商也有近十家，国内已有数 家单位开始研制开发及申报生产。纤维蛋白胶这一新型外用止血剂已引起人们 的广泛关注，在外科领域里的推广应用也受到广泛的关注。

纤维蛋白封闭剂产品基本上在临用前要避免纤维蛋白原和凝血酶或凝血 酶激活物过早反应，在临用时使纤维蛋白原在凝血酶和钙离子的作用下转化为 纤维蛋白，再在第XIII因子的作用下，变为稳定的纤维蛋白网，从而发挥其 止血功效。例如Tisseel/Tissucol使用前，分别用两个注射器抽取两种溶解液， 溶解相应冻干组分，再分别将两种溶解后溶液用两只注射器抽出，并将两只注 射器通过一个三通组装成双联注射器；使用时，将两种溶液同时等量混合喷涂 到创面上，起到止血封闭创面的作用。参见公开号CN1911440A专利的一种纤 维蛋白膜，使用时将纤维蛋白原和凝血酶即时混合，形成一层网络状致密的纤 维蛋白膜。这类即时性凝胶首先要解冻或溶解，混合物要尽可能混匀，然后敷 在出血的创口上。这一过程时间要掌握相当的准确，在纤维蛋白聚合前易被血 液冲走，而如果聚合完成后才使用纤维蛋白胶，则不易粘合在创口上。这在临 床上使用不方便，成本较高。

目前，纤维蛋白封闭剂都是在凝血酶的作用下获得，凝血酶主要来源于牛、 猪等哺乳动物，但哺乳动物凝血酶是一种强抗原，使用凝血酶后会在人体引起 各种免疫反应，而且存在人和哺乳动物共患的疾病例如口蹄疫、疯牛病等传播 的风险。虽然用人凝血酶可以解决部分问题，但利用人凝血酶病毒感染的可能 性依然存在，而且来源少，成本高。利用人本身的凝血酶来制备纤维蛋白胶， 操作复杂，时间较长可行性差。

发明内容