[发明专利]α-半乳糖苷酶基因的优化序列及高效表达菌株

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地涉及α-半乳糖苷酶基因的优化序列及 高效表达菌株。

背景技术

α-半乳糖苷酶，又称为蜜二糖酶，在食品、饲料、医药工业等领域得到 广泛的应用，受到业内的高度重视，被认为是最有应用潜力的酶制剂之一。

我国是动物养殖业大国，每年消耗饲料在1亿吨以上。豆粕是饲料中用 量最大的蛋白质原料，在大豆粕中棉子糖和水苏糖的含量约为7％。它们不能 被家禽消化道的内源酶降解，只有经过消化道微生物发酵以后才能被利用， 发酵过程中产生的CO₂和CH₄等气体，使机体出现一系列的胀气、恶心等症状。 在饲料中添加α-半乳糖苷酶，不仅可以降解低聚糖，提高豆粕的代谢能，同 时还可以消除肠道的胀气现象，增加动物的采食量。在食品工业中，α-半乳 糖苷酶可用于豆奶的发酵，水解豆奶中的水苏糖和蜜三糖，从而获得低α- 半乳糖基寡聚糖含量的豆奶制品，有利于人体消化吸收。另外，在临床医学 上，可以用α-半乳糖苷酶治疗法布里病。目前欧洲和美国已开发出了该类药 物，国内仍处于空白。

发明内容

(一)要解决的技术问题

本发明的目的是提供α-半乳糖苷酶基因的优化序列，本发明的又一目的 是提供一株高效表达重组α-半乳糖苷酶的工程菌株。

(二)技术方案

本发明提供了一株高效表达重组α-半乳糖苷酶的毕赤酵母(pichia pastoris)CGMCC No.2875。该菌株已于2009年01月14日被保藏于中国微 生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏编号为 CGMCC No.2875。

本发明提供了α-半乳糖苷酶基因的毕赤酵母密码子偏好优化序列，其核 酸序列如SEQ ID No：1所示。

本发明还提供了α-半乳糖苷酶的表达载体，它含有上述α-半乳糖苷酶基 因的毕赤酵母密码子偏好优化序列。优选地，所述表达载体为pPIC-agl-opt， 它是由已知表达载体pPICzαA和前述的优化序列连接而成。

本发明还提供了重组α-半乳糖苷酶的表达菌株，它是将前述的表达载体 转化宿主细胞得到的。优选地，所述宿主细胞为毕赤酵母。更优选地，所述 表达菌株为毕赤酵母(pichia pastoris)CGMCC No.2875。

本发明公开了前述优化序列和表达菌株毕赤酵母(pichia pastoris) CGMCC No.2875在工业化生产α-半乳糖苷酶中的应用。

(三)有益效果

本发明提供了α-半乳糖苷酶基因的毕赤酵母密码子偏好优化序列及其高 效分泌表达工程菌株毕赤酵母(pichiapastoris)CGMCC No.2875，该菌株的发 酵活力达到300U/mL，与模式菌株相比提高一倍。该菌株表达得到的重组α- 半乳糖苷酶的最适催化温度为40℃，最适pH值为6.5，接近动物体温和肠道 pH值，适合用做动物饲料添加剂。

本发明所述的菌株已于2009年01月14日被保藏于中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏编号为CGMCC No.2875。

附图说明

图1是α-半乳糖苷酶的最适pH值分析图；

图2是α-半乳糖苷酶的最适温度分析图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1α-半乳糖苷酶酶基因克隆与序列分析