[发明专利]用于组织工程皮肤运输的培养基及其配制方法

权利要求书

1.一种用于组织工程皮肤运输的培养基，其特征在于：其组分及各组分的用量为：

(1)基础培养液：由以下体积百分比的物质混配而成：

DMEM培养液                       60～70％

F12培养液                        20～25％

胎牛血清                         5～20％

(2)营养物质：

氢化可的松                       0.4～0.5μg/mL

表皮细胞生长因子                 5～15ng/mL

异丙基肾上腺素                   1～3×10^-6mol/L

胰岛素                           5～15μg/mL

转铁蛋白                         5～10μg/mL

三碘甲状腺氨酸                   2～6×10^-9mol/L

腺嘌呤                           1～3×10^-4mol/L

维生素C                          50～100μg/mL

霍乱毒素                         0.1～1nmol/L

L-丝氨酸                         1～3×10^-2mol/L

L-肉毒碱                         1～5×10^-5mol/L

软脂酸                           15～35μmol/L

亚油酸                           5～25μmol/L

花生四烯酸                       5～10μmol/L

牛脑垂体提取物                   10～50μg/mL

牛血清白蛋白                     2～7×10^-5mol/L

青霉素                           100U/mL

链霉素                           100mg/mL

两性霉素B                        1～4mg/mL

(3)琼脂                          10～25g/L

PH值调整为7.2～7.4。

2.根据权利要求1所述的用于组织工程皮肤运输的培养基，其特征在于：其配制方法包括以下步骤：

(1)将购买的商用DMEM和F12粉剂分别按照说明书的要求配制成溶液；

(2)取步骤(1)配制的DMEM培养液、F12培养液和胎牛血清混合使其体积百分比分别占到总体积的60～70％、20～25％和5～20％，充分混合，三者体积份数和为100％，制成基础培养液；

(3)将氢化可的松、表皮细胞生长因子、异丙基肾上腺素、胰岛素、维生素C、转铁蛋白、三碘甲状腺氨酸、腺嘌呤、霍乱毒素、L-丝氨酸、L-肉毒碱、软脂酸、亚油酸、花生四烯酸、牛脑垂体提取物、牛血清白蛋白、青霉素、链霉素、两性霉素B按照所述用量添加到基础培养液中，调节PH值7.2～7.4；并将得到的溶液用0.2μm滤器过滤除菌；

(4)琼脂以50～100g/L浓度加热搅拌溶于双蒸水中，高压灭菌，作为储存品；

(5)将步骤(3)得到的培养液无菌放入水浴锅45～55℃加热；

(6)将步骤(4)得到的琼脂储存品无菌放入水浴锅95℃加热，直至完全熔化；

(7)取步骤(6)得到的液态琼脂加入步骤(5)的培养液中，使琼脂的终浓度达到10～25g/L，搅拌并充分混合，分装冷却后即得本发明的组织工程皮肤运输培养基。

3.权利要求1或2所述的培养基在组织工程皮肤运输中的应用。