[发明专利]检测五种人兽共患病病毒的方法及专用试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及检测五种人兽共患病病毒的方法及专用试剂盒。

背景技术

近年来，人兽共患病在世界各地疫情有所回升。其中裂谷热病毒(Rift valleyfever virus，RVFV)、戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus；Rabies virus，HEV)、狂犬病毒(Rabies virus，RV)、水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus，VSV)及口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus，FMDV)均是重要的人兽共患传染病病原，流行范围广，严重危害畜牧业的发展，同时也严重威胁公共卫生安全，被世界动物卫生组织(OIE)列为A类疫病。目前检测上述五种病毒的常用方法主要有：动物接种、病毒分离培养、酶联免疫实验(ELISA)、血清中和试验等方法。近年来，已建立了针对以上病毒的RT-PCR检测方法，可以特异、敏感地检测病原体，在裂谷热病毒(Rift valley fever virus，RVFV)、戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus；Rabies virus，HEV)、狂犬病毒(Rabies virus，RV)、水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus，VSV)及口蹄疫病毒(Foot and mouthdisease virus，FMDV)疫病检测、鉴别诊断方面已经得到了广泛应用。但RT-PCR方法一次仅可检测一种病原体，用于多重感染或未知病原体检测时，需要进行多个实验反应，操作过程复杂，耗费人力和时间。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测人兽共患病病毒的试剂盒。

本发明所提供的检测病毒的试剂盒，包括如下引物对中的至少一种：

用于检测口蹄疫病毒的引物对A：序列表中序列1所示的DNA，序列表中序列2所示的DNA；

用于检测裂谷热病毒的引物对B：序列表中序列3所示的DNA，序列表中序列4所示的DNA；

用于检测戊型肝炎病毒的引物对C：序列表中序列5所示的DNA，序列表中序列6所示的DNA；

用于检测水泡性口炎病毒的引物对D：序列表中序列7所示的DNA，序列表中序列8所示的DNA；

用于检测狂犬病毒的引物对E：序列表中序列9所示的DNA，序列表中序列10所示的DNA。

所述试剂盒还可包括Mg离子、dNTPs、DNA聚合酶。

所述试剂盒还可包括DMSO；所述dNTPs为dATP、dTTP、dGTP、dCTP等摩尔比混合物。

本发明的另一个目的是提供一种检测病毒的方法。

本发明所提供的检测病毒的方法，是用上述任一所述试剂盒对待测样品进行PCR扩增，检测PCR产物的大小，判断所述待测样品中病毒种类；

所述判断方法如下：

若所述PCR产物为389bp，则所述待测样品中含有口蹄疫病毒；

若所述PCR产物为499bp，则所述待测样品中含有裂谷热病毒；

若所述PCR产物为137bp，则所述待测样品中含有戊型肝炎病毒；

若所述PCR产物为224bp，则所述待测样品中含有水泡性口炎病毒；

若所述PCR产物为274bp，则所述待测样品中含有狂犬病毒。

其中，所述对待测样品进行PCR扩增的方法可包括如下步骤：

(1)提取所述待测样品的核酸RNA；

(2)将所述RNA反转录得到cDNA；

(3)以所述cDNA为模板，用上述任一所述试剂盒进行PCR扩增。

所述PCR扩增的反应体系包括上述任一所述试剂盒中的引物对、Mg离子、dNTPs、DMSO；

所述引物对中的任一条引物在所述反应体系中的浓度如下：引物对B0.6mol/L、引物对A0.2mol/L、引物对D 0.2mol/L、引物对E 0.6mol/L、引物对C 0.4mol/L；所述Mg离子在所述反应体系中的浓度为2mmol/L；所述DMSO在所述反应体系中的浓度为1％(体积百分含量)；所述dNTPs在所述反应体系中的浓度为150mmol/L。

所述PCR扩增的反应条件中退火温度为54℃，每个循环的退火时间为30s。