[发明专利]制备抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗体的方法

权利要求书

1.一种制备A型肉毒毒素免疫原的方法，包括如下步骤：

1)将序列表中序列1所示基因转入宿主菌中，得到含有所述基因的重组菌；

2)发酵步骤1)得到的重组菌，得到含有A型肉毒毒素免疫原的产物；

3)将步骤2)得到的产物进行阳离子交换层析，得到一次纯化产物；所述阳离 子交换层析使用SP阳离子交换柱，所用的洗脱缓冲液为含300mM NaCl、pH值为 7.4的20mM磷酸钠溶液；

4)将步骤3)得到的一次纯化产物进行阴离子交换层析，得到二次纯化产物； 所述阴离子交换层析中使用Q阴离子交换层析柱；

5)将步骤4)得到的二次纯化产物进行疏水层析，得到A型肉毒毒素免疫原； 所述疏水层析使用辛基HIC疏水层析柱，所用的洗脱缓冲液为含50mM NaCl的20mM 磷酸钠溶液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述基因是通过重组表达载体 pTIG-Trx-AHc转入所述宿主菌中的；

所述重组表达载体pTIG-Trx-AHc是通过将序列表中序列1所示基因插入原核 表达载体pTIG-Trx的多克隆位点得到的；

所述原核表达载体pTIG-Trx是通过将序列表中序列2所示的硫氧还蛋白基因 插入载体pET-22b(+)的多克隆位点得到的。

3.一种制备抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗体的方法，包括如下步骤：用权利 要求1或2所述方法制备A型肉毒毒素免疫原，得到A型肉毒毒素免疫原；将所述 A型肉毒毒素免疫原免疫动物，制备得到抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗体；所述动 物为马。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤：在 所述免疫后，取动物免疫血清，用胃蛋白酶消化，得到切除副作用片段的抗A型肉 毒毒素免疫球蛋白抗体。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法中，在所述取动物免 疫血清后，所述用胃蛋白酶消化前，还包括灭活所述血清的步骤。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述方法中，在所述用胃蛋白 酶消化后，还包括用硫酸铵沉淀所述切除副作用片段的抗A型肉毒毒素免疫球蛋白 抗体的步骤。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述方法中，在所述硫酸铵沉 淀后，包括用DEAE阴离子交换剂进行纯化的步骤。