[发明专利]一种重组风疹病毒蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程、疫苗研制和诊断试剂等领域，具体地涉及一种重组风疹病毒蛋白及其应用。

背景技术

风疹病毒是披膜病毒科风疹病毒属的唯一成员，外形呈球形的风疹病毒(RUBELLA VIRUS，RUV)是风疹的病原体，人类是其唯一宿主。风疹是一种以发热、呼吸道卡痰和出疹为主要症状的急性呼吸道传染病。孕妇，特别是妊娠早期的孕妇感染风疹病毒可导致胎儿先天性风疹综合征(CONGENITAL RUBELLASYNDROME，CRS)。风疹及CRS在全世界均有发生，亚洲感染率高。孕妇患风疹后，特别是妊娠的前3～4个月内，风疹病毒可侵犯胎盘并传染给胎儿，引起先天性风疹高达30％～35％。孕妇除发生死胎、流产与早产外，可出现一种或多种畸形，如心血管畸形、眼部疾病、神经性耳聋、小头畸形、智力发育不全等，婴儿出生后病死率1岁内可达10％～20％(Miller E，Cradock2Watson J E，and Pollock T.M.Consequences of clnfirmed maternal rubella at successive stages of pregnancy〔J〕.Lancet 1982，8032：7812782)。建立RV感染的快速、准确检测方法是预防RV感染的关键所在。

目前风疹病毒感染的诊断方法有病毒分离(Grutadauria S，Cordoba P，Cuffini C，et al..Cell-fusion assay for the detection of rubella virus in Vero cells ClinDiagn Vir。1，1998；10)(1)：9-16)；血清学诊断(Tipples GA，Hamkar R，MohktariAzad T，et al..EvaLuation of ru-bella IgM enzyme immunoassays.J Clin Virol，2004；30(3)：233-238.)和分子生物学检测(Katow S.Rubella virus genome diagnosisduring pregnancy and mechanism of congenital rubella.Intervirology，1998；41：163-169)。免疫学方法由于操作简便，临床常用，适于RV感染的实验室诊断和大规模现场调查。目前大多检测试剂盒用的RV蛋白抗原来源于病毒培养物或是重组表达的单一蛋白片段，或者由于蛋白质抗原纯度低及特异性差，造成假阳性而降低检测特异性。尽管多种单一片段组合制备检测试剂可以避免上述问题，但必然要求多次进行提取纯化过程，而且小分子蛋白质或多肽的提纯技术要求更高。本发明提供了一种用基因工程方法生产的重组抗原，含有更多的高特异性、强免疫原性蛋白质序列，能够有效避免前述问题，可为风疹病毒感染的检测提供更为特异、准确的原料。

在全球范围内，目前缺乏有效治疗病毒感染药物的情况下，通过接种疫苗预防病毒感染成为一种重要的医学干预手段。同时，RV疫苗的研制也是进行RV研究的重要领域之一。

发明内容

本发明的目的是提供一种重组风疹病毒蛋白，本发明的另一目的是提供该重组风疹病毒蛋白在制备检测试剂盒中的应用。

本发明的技术方案

本发明提供了一种编码风疹病毒蛋白的重组核酸，其核苷酸序列如序列1所示。同时提供了由该重组核酸表达的风疹病毒蛋白，其氨基酸序列如序列2所示。

本发明还提供了一种风疹病毒蛋白的表达载体pET-28a-RV，它是将序列1所示所述的核苷酸序列插入到质粒pET-28a上得到的重组质粒，其质粒图谱如附图1所示。将表达载体pET-28a-RV导入大肠杆菌中，得到表达风疹病毒蛋白的工程菌株。

本发明利用序列1所示核苷酸序列通过基因工程方法制备人风疹病毒蛋白可以通过如下步骤实现：

1)获得具有序列1所示的核苷酸序列；

2)将该核苷酸序列导入质粒，优选pET-28a质粒；

3)将该质粒导入原核宿主细胞，优选大肠杆菌宿主细胞，更优选BL21(DE3)菌株中；

4)在有利于所述核苷酸序列表达的条件下培养所述宿主细胞；

5)回收、纯化及复性所表达的重组蛋白。

本发明还涉及包含本发明风疹病毒蛋白的组合物以及试剂盒。所述的组合物可作为检测风疹病毒感染的试剂。所述的组合物可作为检测风疹病毒感染的试剂盒。