[发明专利]一种重组弓形虫蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程、疫苗研制和诊断试剂等领域，具体地涉及一种重组弓形虫蛋白及其应用。

背景技术

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii Nicolle&Manceaux，1908)是猫科动物的肠道球虫，由法国学者Nicolle及Manceaux在刚地梳趾鼠(Ctenodactylus gondii)单核细胞内发现，虫体呈弓形，命名为刚地弓形虫。该虫呈世界性分布，人和许多动物都能感染，引起人畜共患的弓形虫病，尤其在宿主免疫功能低下时，可造成严重后果，属机会致病原虫(opportunistic protozoan)。

先天性弓形虫病只发生于初孕妇女，经胎盘血流传播。受染胎儿或婴儿多数表现为隐性感染，有的出生后数月甚至数年才出现症状；也可造成孕妇流产、早产、畸胎或死产，尤以早孕期感染，畸胎发生率高。据研究表明，婴儿出生时出现症状或发生畸形者病死率为12％，而存活中80％有精神发育障碍，50％有视力障碍^[1]。以脑积水、大脑钙化灶、视网膜脉络膜炎和精神、运动的障碍为先天性弓形虫病典型症侯。

获得性弓形虫病可因虫体侵袭部位和机体反应性而呈现不同的临床表现。多数隐性感染者，当患有恶性肿瘤，施行器官移植，长期接受免疫抑制剂、放射治疗、细胞毒剂等医源性免疫受损情况下或先天性、后天性免疫缺陷者，如艾滋病患者、孕期妇女等都可使隐性感染状态转为急性重症，使原有病症恶化。建立TOX感染的快速、准确检测方法是预防TOX感染的关键所在。

目前弓形虫感染诊断方法主要有免疫学检测、直接镜检、病原体分离和聚合酶链反应(PCR)检测等^[1-4]。免疫学方法由于操作简便快捷适于临床使用。本发明提供了一种用基因工程方法生产的重组抗原，能够避免由于蛋白质抗原纯度低或特异性差造成假阳性而降低检测特异性等问题，为弓形虫感染的检测提供更为特异、准确的原料。

在全球范围内，目前缺乏有效治疗弓形虫感染药物的情况下，通过接种疫苗预防弓形虫感染成为一种重要的医学干预手段。同时，弓形虫疫苗的研制也是进行弓形虫研究的重要领域之一。本发明提供的弓形虫重组蛋白具有高特异性、强免疫原性和尽量完整的抗原决定簇，在弓形虫疫苗研制领域具有实际应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种重组弓形虫蛋白，本发明的另一目的是提供该重组弓形虫蛋白在制备检测试剂盒中的应用。

本发明的技术方案

本发明提供了一种编码弓形虫蛋白的重组核酸，其核苷酸序列如序列1所示。同时提供了由该重组DNA序列编码的弓形虫蛋白，其氨基酸序列如序列：2所示。

本发明还提供了一种弓形虫蛋白的表达载体pET-28a-TOX，它是将序列1所示所述的核苷酸序列插入到质粒pET-28a上得到的重组质粒，其质粒图谱如附图2所示。将表达载体pET-28a-TOX导入大肠杆菌中，得到表达弓形虫蛋白的工程菌株。

本发明利用序列1所示核苷酸序列通过基因工程方法制备弓形虫蛋白可以通过如下步骤实现：

1)获得具有序列1所示的核苷酸序列；

2)将该核苷酸序列导入质粒，优选pET-28a质粒；

3)将该质粒导入原核宿主细胞，优选大肠杆菌宿主细胞，更优选BL21(DE3)菌株中；

4)在有利于所述核苷酸序列表达的条件下培养所述宿主细胞；

5)回收、纯化及复性所表达的重组蛋白。

本发明还涉及包含本发明弓形虫蛋白的组合物以及试剂盒。所述的组合物可作为检测弓形虫感染的试剂。所述的组合物可作为检测弓形虫感染的试剂盒。

本发明提供的弓形虫蛋白抗原具有高特异性、强免疫原性和尽量完整的抗原决定簇，因此，本领域技术人员可以想到，本发明的弓形虫蛋白可以用来制备弓形虫疫苗，如亚单位疫苗等，同样，本发明所公开的如序列1所示的核苷酸序列也可用来制备DNA疫苗。因此本发明还涉及包含本发明弓形虫蛋白或核酸的弓形虫的疫苗。

发明的详述

本发明公开了一种编码弓形虫蛋白的如序列1所示的核苷酸序列，利用该核苷酸序列制备弓形虫蛋白的方法，由该方法制备的包含序列2所示氨基酸序列的弓形虫蛋白，以及包含该蛋白的组合物和试剂盒，同时还公开了它们在检测弓形虫感染的应用。另外，本发明的弓形虫蛋白及本发明的核酸还可用于弓形虫疫苗的制备。

本发明的一个实施方案涉及一种编码弓形虫蛋白的如序列1所示的核苷酸序列。碱基的编号为常规的5’至3’顺序。