[发明专利]一种检测土拉菌的基因液相芯片及其检测方法

权利要求书

1.一种检测土拉菌(Francisella tularensis)的基因液相芯片，该芯片包括：荧 光编码的微球、捕获探针、引物、PCR反应体系、链亲和素-藻红蛋白；

其中所述引物包括：

Ft-F    GGGCAAATCTAGCAGGTCAAG

Ft-R    GCTGTAGTCGCACCATTATCCT

下游引物5’端经生物素标记：

Ft-R：5’-生物素-GCTGTAGTCGCACCATTATCCT；

其中所述捕获探针选自：

探针名称    探针序列(5’-3’)

Ft    TGCTGGTTTAACATGGTTCTTTGG

上面所述探针在合成时在5’端进行氨基修饰，并且连接15-20个T 作为间隔链，然后将探针与所选的编码微球进行偶联。

2.用权利要求1所述的基因液相芯片检测土拉菌的非诊断性检测方法， 该方法包括：样本核酸的提取，PCR扩增，检测病原体核酸；其中所述 样本核酸的提取包括以下步骤：

1)向每管样本中加入NaI，振荡混匀，煮沸；

2)离心，转上清液至另一含20％玻璃粉液的离心管中；

3)充分混匀，室温放置，使暴露的DNA吸附于玻璃粉上；离心，小心倾 去上清液；

4)向玻璃粉-DNA沉淀中加入75％乙醇，充分混匀，离心，小心倾去上 清液；

5)重复步骤4)，然后置于37℃恒温箱内干燥；

6)向上述干燥的玻璃粉-DNA沉淀中加20μl TE，充分混匀，65℃加热， 离心，回收上清液备用；

其中所述检测步骤包括：

1)取偶联微球，装于PCR管中，根据微球计数结果计算相应加入量；

2)向各管中加5～17μl PCR扩增得到的产物，混匀；

3)95℃变性10分钟；随后45～60℃反应10～30分钟；

4)离心或抽滤去掉未结合的PCR产物；

5)再向各孔加链亲和素-藻红蛋白，室温避光孵育，抽滤去掉未结合的 SA-PE；

6)再向各孔加入75μlTE悬浮液，振荡使微球重悬；上检测仪器进行检测。