[发明专利]鼠RANK胞外蛋白晶体

权利要求书

1.一种胞外区域蛋白的晶体，其中所述晶体包括鼠RANK胞外区域的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的晶体，其中所述胞外区域是指鼠RANK单体N-末端从26位氨基酸至210位氨基酸。

3.根据权利要求1所述的晶体，其中所述晶体由鼠RANK单体链A及单体链B形成的二聚体构成。

4.根据权利要求1-3任一项所述的晶体，其中所述晶体具有空间群P2₁2₁2₁，晶胞参数为：和

5.根据权利要求1-3中任一项所述的晶体，其中所述二聚体以反向平行形式存在；所述单体链A及单体链B含有四个CRD结构域，存在于所述四个CRD结构域中的多个二硫键使得所述两个单体链形成细长的带状；所述两个单体链的重叠所形成的均方根差为除去溶剂后的二聚体所形成的总面积为所述两个单体之间所包含的面积被等分，所述二聚体的长度与所述RANK的单体链长度近似。

6.根据权利要求5所述的晶体，其中在所述二聚体中，所述四个CRD结构域具有不同的均方根差值，所述均方根值的范围为对于C α原子从CRD3的至CRD2的

7.根据权利要求5所述的晶体，其中所述单体链A以及单体链B主要在所述CRD2和CRD3结构域发生相互作用，涉及到所述相互作用的重要残基为所述单体链A的Gln-145、Asn-147和Lys-171以及所述单体链B的Asn-147、Gln-145和Glu-84。

8.根据权利要求1-3中任一项所述的晶体，其中所述单体链A以及所述单体链B分别存在一个钠离子，所述钠离子可与所述两个单体链上的Cys-134、Ala-135、Phe-138、Val-163以及骨架上的Ser-161侧链的羰基基团螯合。

9.一种制备RANK胞外蛋白晶体的方法，包括：(1)将纯化的RANK在pH 7.00的1M TRIS缓冲溶液中浓缩成10mg/mL；

(2)在温度为294K的条件下，利用高通量纳升坐滴蒸汽扩散方法形成RANK胞外蛋白的晶体；3)所述RANK晶体在20％PEG 3350，0.2M酒石酸钠条件下生长。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述RANK晶体在30％的PEG 5000，0.2M的硫酸钠，以及pH6.5的0.1M MES的条件下生长。

11.根据权利要求9所述的方法，其中所述RANK晶体在含有100nL蛋白质溶液和100nL pH为6.5的10％PEG 3350，15％PEG 5000，0.1M硫酸铵，0.1M酒石酸钠和0.05M MES的池液的液滴中生长。

12.权利要求1-3中任一项所述的鼠RANK胞外蛋白晶体在筛选治疗骨吸收类疾病或抗骨吸收药物中的应用，包括：

根据所述蛋白晶体的结构，通过计算机模拟来筛选可能结合到特定部位的任一种多肽、蛋白质、抗体、免疫结合物、无机物或有机物；

根据该蛋白晶体的结构，通过计算机模拟来筛选可能结合到特定部位的已知多肽、蛋白质、抗体、免疫结合物、无机物或有机物；

其中与所述RANK胞外蛋白序列具有至少50％同源性的任何RANK胞外蛋白结合的多肽、蛋白质、抗体、免疫结合物、无机物或有机物或者与RANK胞外蛋白的亲和力PD₂值＞4.0的多肽、蛋白质、抗体、免疫结合物、无机物或有机物为候选物；

通过生物学实验确定所述候选化合物在治疗骨吸收类疾病或抗骨吸收药物中的应用。