[发明专利]预测中国人2型糖尿病易感性的试剂盒及引物

说明书

技术领域

本发明涉及用于预测2型糖尿病易感性的试剂盒及引物，更具体地，本发明涉及利用新鉴别的2型糖尿病易感基因RORC(retinoid-related orphan receptorγ)的6个单核苷酸多态性(SNP)位点设计的预测2型糖尿病易感性的试剂盒和引物。本发明还涉及RORC基因在制备预测2型糖尿病易感性的诊断剂中的应用。

背景技术

大量流行病学资料表明，糖尿病是一种具有明显遗传倾向的复杂的多基因遗传病。遗传因素可明显影响机体对胰岛素的敏感性。目前对糖尿病易感基因的研究策略主要包括定位克隆法、候选基因法以及二者相结合的定位候选克隆法

近年来，大多数研究者致力于通过定位克隆法寻找糖尿病相关基因，即寻找患病家系成员间共享的染色体DNA区域间的连锁。已发现2型糖尿病中的一些相对较少见的单基因形式，称为青年晚发型糖尿病(maturity-onset diabetes of the young，MODY)，是由于突变导致了β细胞功能低下。这些病人通常在青春期到成人早期发病，表现为葡萄糖反应性胰岛素分泌缺陷。这些致病基因中有6个分别编码葡萄糖激酶、转录因子HNF1α、1β、4α及胰岛素启动因子(IPF1)，神经细胞分化蛋白(NeuroD1)。这些基因的突变可最终导致高血糖血症。这些单基因糖尿病的发病率还不确切，估计占所有2型糖尿病的5％。但是，单纯利用定位克隆的策略来确定多基因遗传病的成功报道尚不多见。

除定位克隆法外，目前对多基因遗传病的相关基因进行研究还有一种常用的方法-候选基因法，即直接研究疾病候选基因的变异与疾病表型之间的关系。该方法主要基于对家系或人群的病例-对照关联分析。关联分析不需要大的家系研究，而是比较某个或某一套标记在患者和正常个体的分布程度。某种标记如果在患病个体中分布十分明显，那么就可以认为该标记与疾病表型相关联。

但是，候选基因法中由于对致病基因所在位置没有足够了解，在选择候选基因上存在较大的盲目性，主要针对与疾病发生发展相关的一些代谢通路进行研究。将上述两种方法相结合的定位候选克隆法在一定程度上弥补了任何单一一种方法的局限性，为目前多基因遗传病研究中所普遍采用的策略。

目前糖尿病候选基因的选择主要有两个来源，一是与疾病发生发展相关的一些代谢通路，一是由定位克隆法所确定的染色体区域。2型糖尿病是一种多基因遗传病，其易感性是多个基因相互作用的结果，因而本发明人以一种新的思路来选择候选基因，即以本组以往研究所获得的中国汉族人群2型糖尿病易感基因为靶基因，在其共表达基因和所处的代谢通路中寻找候选基因，以期构建2型糖尿病易感基因网络图。

同遗传病研究策略相对应，其研究工具一多态性标记也从第一代的限制性片段长度多态性(Restrictive Fragment Length Polymorphism，RFLP)，第二代的微卫星标记(Microsatellite Marker)发展到第三代的单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)。尤其在对多基因遗传病进行病例-对照关联分析中，需要利用大量高密度的标记物，前两代多态性标记已不能满足这种要求。因此，近年来，SNP作为第三代遗传图谱的构建者已越来越引起人们的广泛关注。

单核苷酸多态性(SNP)主要是指基因组水平上由单核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种，占所有已知多态性的90％以上。SNP在人类基因组中广泛分布，平均每500-1000个碱基中就有1个，其总数估计可达300万个甚至更多。近年来，随着人类基因组及遗传学研究的进展，SNP在全面深入地了解个体和群体间基因组的变异或多态性及疾病研究等方面也越来越显示出其重要意义。将SNP用于疾病易感基因定位的一个最大的优点就是它的分布广泛性。其次是它有比微卫星更高的稳定性，可以最大限度地减少遗传过程中由于序列变异所导致的信息遗失。另外，SNP很容易实现高通量的分型，短时间内可以产生大量的结果，这一点是微卫星所无法比拟的。SNP的上述特点决定了它非常适合于进行像糖尿病这样的多基因疾病，尤其是多个微效基因所导致的疾病的定位研究。选择合适的病例和正常对照，采取关联分析的研究方法，对SNP而言，是非常适合的。