[发明专利]含有重组人α-2b干扰素的重组乳酸菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种含有重组人α-2b干扰素的重组乳酸菌及其应用。

背景技术

α-2b干扰素属于I型干扰素，是机体白细胞分泌的一种有广谱抗病毒、抗肿瘤及免疫调节作用的细胞因子。自1987年Isaacs和Lindermann发现干扰素以来，人类就一直试图将其应用于临床。而直到20世纪70年代后期，随着基因工程技术的出现及发展，用这种方法生产的干扰素才进入了工业化生产，并且大量投放市场。目前，经大肠杆菌和中国仓鼠卵细胞表达的重组人α-2b干扰素在临床上得到广泛应用，主要用于治疗由病毒引起的白血病、乙型、丙型肝炎等。重组干扰素蛋白需要连续注射高剂量药才能达到治疗效果，且在血液中易被降解易产生副作用，还可能产生中和抗体。因此有必要研究开发新型的给药方式，以提高干扰素在体内的作用，延长在体内的半衰期和降低免疫原性。

乳酸菌(lactic acid bacteria，LAB)千百年来广泛应用于食品加工工业，是公认的安全(GRAS)的食品级微生物。乳酸菌的主要作用包括改善食品风味、防止食品腐败、增加养分、平衡消化道菌群、降低胆固醇、控制内毒素等。而分子生物学技术的不断进步为探索其新的应用潜力提供了基础：如利用基因工程乳酸菌在生物反应器内发酵食品或直接在人和动物消化道内生产蛋白等，其中最有前景的应用即是乳酸菌作为活载体将治疗性蛋白或抗原传递至黏膜表面，继而同时诱导黏膜免疫和系统免疫。

Wells等发现用表达破伤风毒素片段C(tetanus toxin，TTFC)的重组乳酸乳球菌给小鼠口服免疫后，能使小鼠免受致死剂量的TTFC攻击(Wells JM，Wilson PW(1993)Lactococcus lactis：high-level expression of tetanustoxin fragment C and protection against lethal challenge.Mol Microbiol.19938(6)：1155-62)。表达细胞因子的乳酸乳球菌也可以有效刺激黏膜免疫应答。表达有IL-12的重组乳酸乳球菌与表达HPV16(人乳头状瘤病毒)E7抗原的重组乳酸乳球菌共同免疫小鼠后，检测到Th1细胞因子、IL-2、IFN-γ的分泌水平均增加，能有效保护小鼠免受HPV-16诱导的肿瘤的攻击(Bermudez-Humaran LG，Cortes-Perez NG，Lefevre F(2005)A novel mucosalvaccine based on live Lactococci expressing E7 antigen and IL-12 inducessystemic and mucosal immune responses and protects mice against humanpapillomavirus type 16-induced tumors.J Immunol，175，7297-302)。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组人α-2b干扰素的重组乳酸菌及其应用。

本发明的重组人α-2b干扰素的编码基因，是如下1)或2)或3)的核苷酸序列：

1)序列表中序列1所示的核苷酸序列；

2)在高严谨条件下与序列表中序列1的核苷酸序列杂交且编码重组人α-2b干扰素的核苷酸序列；

3)与序列表中序列1所示的核苷酸序列具有90％以上的同源性且编码重组人α-2b干扰素的核苷酸序列。

所述的高严谨杂交条件是指，将杂交膜置于预杂交液(0.25mol/L磷酸钠缓冲液，pH7.2，7％SDS)中，65℃预杂交30min；弃预杂交液，加入杂交液(0.25mol/L磷酸钠缓冲液，pH7.2，7％SDS，同位素标记的核苷酸片段)，65℃杂交12hr；弃杂交液，加入洗膜液I(20mmol/L磷酸钠缓冲液，pH7.2，5％SDS)，65℃洗膜2次，每次30min；加入洗膜液II(20mmol/L磷酸钠缓冲液，pH7.2，1％SDS)，65℃洗膜30min。

含有上述重组人α-2b干扰素的编码基因的重组表达载体、转基因细胞系也在本发明的保护范围内。

本发明的另一目的在于提供一种重组乳酸菌，是将含有所述的重组人α-2b干扰素的编码基因的DNA分子导入乳酸菌中，获得该重组乳酸菌。

为了便于重组乳酸菌分泌蛋白，所述重组人α-2b干扰素的编码基因的5′端连有编码信号肽的DNA分子。

所述信号肽的氨基酸序列为序列表的序列2。