[发明专利]一种漆酶及其制备方法与专用生产菌株

说明书

技术领域

本发明涉及微生物酶学领域，特别涉及一种漆酶及其制备方法与专用生产菌株。

背景技术

漆酶(p-diphenol oxygen oxidoreductase，EC 1.10.3.2.)是一种蓝色、含有多个铜离子的酚氧化酶，能催化酚类物质的氧化还原反应。漆酶氧化的底物包括：酚类及其衍生物、芳胺及其衍生物、芳香羧酸及其衍生物等。目前通过不断研究，漆酶可氧化的非酚底物范围还在不断扩大。漆酶(1accase)可降解木质素中的酚类和非酚类结构，在木质素的生物降解中发挥着重要的作用；另外，由于木质素中的许多化学键普遍存在于芳香族化合物中，而漆酶对木质素的降解又是氧化性的和非特异性的，这就使得漆酶也能降解芳香族化合物。漆酶能把分子氧直接还原为水，在没有H₂O₂存在下，可催化有机污染物的氧化。漆酶又能使木素类多酚物质以游离基方式进行氧化聚合，替代传统木材工业合成树脂胶粘剂或其它化学品，用无污染、低能耗的酶学的方法取代污染严重的化学方法，把污染消除在源头。因此，漆酶在生物技术和环境保护方面有着巨大的应用潜力。

白腐菌能够产生漆酶、木质素过氧化物酶(LiP)和锰氧化物酶(MnP)等，是目前能够将木质素彻底降解为二氧化碳和水的唯一生物。其产生的漆酶比木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶更具有热稳定性。因此，这一生物类群引起了世界生物学家的极大兴趣。

白腐菌中的血红密孔菌被认为是研究漆酶的理想菌株。然而，现有已知的菌株其漆酶活性较低。因此，漆酶的高产菌株的研究迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的在于提供一种漆酶及其制备方法与专用生产菌株。

本发明提供的血红密孔菌(Pycnoporus sanguineus)MK2001，已于2009年03月05日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区大屯路)，保藏号为CGMCC № 2932。

菌株MK2001是从海南腐木上分离，并且通过土豆汁培养基(PDA)筛选培养获得。该菌是一种需氧菌，最适生长温度为30℃，发酵培养时分泌漆酶到培养基中。

本发明的另一目的在于提供所述血红密孔菌(Pycnoporus sanguineus)MK2001CGMCC № 2932在制备漆酶中的应用。

所述应用是将血红密孔菌(Pycnoporus sanguineus)MK2001 CGMCC № 2932在有氧及避光条件下发酵培养，发酵培养温度可为30±1℃。

所述发酵培养用的发酵培养基包括碳源、氮源和无机组分。

所述发酵培养基的碳源可包括但不限于以下一种或几种：麦芽糖、蔗糖和葡萄糖，所述碳源优选用麦芽糖。这三种糖作为碳源时菌株生长速度差别不大，但用麦芽糖作碳源时，比蔗糖和葡萄糖作碳源时产生的漆酶活性高。

所述发酵培养基的氮源可包括但不限于酒石酸铵；所述发酵培养基的无机组分包括硫酸亚铁、硫酸镁、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钙和氯化钴。

在实际应用中，还可加入营养成分如维生素B₁、B₂、B₆等。在培养基中加入小麦麸皮，漆酶产量可以提高2-3倍。加入玉米粉，漆酶的产量会进一步得到提高。