[发明专利]一对Q型烟粉虱特异性SCAR引物及快速PCR检测方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体地，本发明一对Q型烟粉虱特异性SCAR引 物及快速PCR检测方法和试剂盒。

背景技术

烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)属同翅目，粉虱科，小粉虱属，是一种严重 危害农业生产的入侵性害虫，为世界自然保护联盟(IUCN)所列出的全球100种最 危险的入侵物种之一，其寄主植物包括蔬菜、花卉在内的600种以上。烟粉虱的危 害方式有三种，包括直接吸取植物汁液、分泌蜜露影响植物的光合作用，传播40余 种植物病毒、造成植物病毒病大发生，引起植物生理异常、使产品产量和质量明显 下降，给农业生产造成了巨大的经济损失。1991-1992两年间，美国的加利福尼亚、 佛罗里达、德克萨斯等地由于烟粉虱大暴发而造成的经济损失共计约7亿美元。

烟粉虱是一正在快速进化的复合种，种下包含多个生物型或隐存种。尽管一般 认为B型烟粉虱具有比其它生物型烟粉虱更强的入侵性，然而由于Q型烟粉虱具有 更稳定的抗药性和更强的生物学优势以及可以在多种杂草上快速建立种群的特性， 因此在世界某些地区Q型烟粉虱种群仍占上风，并越来越引起国际上的高度重视。 Q型烟粉虱起源于地中海地区，原来仅分布在伊比利亚半岛，但近期研究发现已遍 布意大利、以色列及摩洛哥的整个北部地区，并在美国、墨西哥、危地马拉、日本 等国家发现危害；我国于2003年在云南昆明市郊花卉市场的一品红上首次发现Q型 烟粉虱，2004年又相继在北京海淀区、河南郑州市发现，2005年发现在浙江局部地 区大量发生危害。Q型烟粉虱是传入我国的另一种外来入侵生物，鉴于其目前仅在 我国局部地区发现，而且Q型烟粉虱在国外一些地区已造成了严重的危害，比B型 烟粉虱具有更强的危害性和入侵性，在我国具有进一步扩散和蔓延的可能性。并且 事实上，Q型烟粉虱近些年在世界各地迅速扩散，在许多地区已经逐渐成为最主要 的致害类型。而Q型烟粉虱的传播以人为传播为主，因此应该加强对Q型烟粉虱的 检疫和监测，杜绝人为传播。

加强检疫和监测必需建立一套快速而准确的分子检测方法。目前国际上已有多种 方法用于烟粉虱生物型鉴定：1)形态特征鉴定；2)酯酶、同工酶位点多态性分析； 3)PCR技术等。但目前国内针对Q型烟粉虱尚没有标准的检测方法。

在烟粉虱生物型检测和鉴定中应用较为广泛的是mtDNACOI技术。mtDNACOI 技术检测是利用通用型的引物，在DNA聚合酶的催化下，对目标DNA进行体外扩 增，然后将PCR产物回收、纯化、测序，根据序列比对和系统发育树构建来判断检 测结果。SCAR-PCR技术检测是利用特异性的引物，根据预期DNA条带的有无来判 断检测结果，无需测序和序列比对，具有灵敏度高，特异性强，快速和简便等优点。

发明内容

本发明的目的为提供一对Q型烟粉虱特异性SCAR引物。

本发明的再一目的为提供一种Q型烟粉虱特异性基因片段。

本发明再一目的为提供一种Q型烟粉虱的特异性快速PCR检测方法。

本发明的另一目的为提供一种Q型烟粉虱的特异性快速PCR检测试剂盒。

本发明根据Q型烟粉虱特有的基因组DNA序列，设计一对特异性引物，该引 物只对Q型烟粉虱具有扩增能力。是对Q型烟粉虱mtDNA COI技术检测方法的补 充和改进。同时，本方法采用SCAR-PCR技术，提高了检测的准确性和灵敏度，节 约了检测时间，在Q型烟粉虱检测/监测方面具有很高的应用价值，可以试剂盒的形 式在我国口岸、世博会园区以及种苗调运中推广。

根据本发明的一对Q型烟粉虱特异性SCAR引物为：

引物BTQE：5′-TGCTTGTCGAAGAGGGTC-3′；和

引物BTQF：5′-TTTAGAAACGTGCCGAAT-3′。

根据本发明的Q型烟粉虱特异性基因片段的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。

根据本发明的Q型烟粉虱特异性检测方法包括使用上述SCAR引物进行PCR扩 增的步骤。

根据本发明的Q型烟粉虱检测特异性检测试剂盒包括上述Q型烟粉虱特异性 SCAR引物。

本发明的Q型烟粉虱特异性SCAR引物及快速PCR检测方法，用于快速检测Q 型烟粉虱。与国际现有方法相比，本发明具有以下的技术优势：