[发明专利]猪圆环病毒Ⅱ型灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于兽医生物新医药技术领域，涉及一种猪圆环病毒II型灭活疫苗及 其制备方法。

背景技术

自1991年以来，PCV2感染引起的断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、 猪呼吸疾病综合征(PRDC)、猪皮肤和肾病综合征(PDNS)等多种疾病(总称 为猪圆环病毒病，PCVDs)给全球养猪业造成了巨大的损失。病毒感染产生的 免疫抑制能够导致现有疫苗免疫失败，造成多种病原混合(或继发)感染，并 使疾病流行更加严重。

在田间，PMWS主要出现于断奶仔猪，猪群表现为进行性消瘦、发育障碍、 皮肤苍白，淋巴结肿大和黄疸，其发病率为3％-50％，死亡率为8％-35％； PRDC主要出现于育肥后期，其临床症状主要为非常严重的咳嗽和呼吸困难， 迁延难治且使用抗生素无效，其发病率可达30-70％，死亡率可达4-6％，发 病猪群生产性能显著降低；PDNS主要发生于断奶猪和育肥猪，最常见的临床症 状为皮肤出现红疹，常见于后躯、后肢、背侧耳廓和腹部，其发病率可达2-14％， 死亡率可达15-40％。

目前，PCVDs的治疗原则主要是对症治疗和减少合并感染，但效果并不理 想。有研究表明，PCV2中和抗体可抑制病毒复制，中和抗体水平愈高则病毒复 制速度愈慢，PCVDs的发生机率也愈低。还有研究提示，高滴度的母源PCV2抗 体可以预防仔猪感染PCV2。由此可见：特异性疫苗可用于控制本病。

近年来，人们一直在致力于PCV2疫苗的开发应用研究，并开发出了各种 形式的PCV2疫苗，特别是灭活疫苗对猪有一定的免疫保护作用，但是应用效 果仍不理想，主要表现在：

(1)抗原浓度较低：PCV2在细胞中的生长滴度较低，一般仅为 10³TCID₅₀/ml左右，而疫苗产量和抗原剂量又是PCV2灭活疫苗得以大规模应 用的关键，因此降低生产成本、提高疫苗质量与产量成为目前急待解决的棘手 问题；

(2)疫苗生产工艺较粗糙：每个病毒都有适合自己的最佳生产工艺，而在 PCV2灭活疫苗的制备过程中多数人忽略了对生产工艺的优化和完善，因而直接 降低或破坏了PCV2抗原的免疫活性，导致了免疫效果的降低。

发明内容

针对当前PCV2疫苗在应用方面存在的不足，本发明提供一种病毒滴度高、 免疫原性好、免疫持续期长的猪圆环病毒II型灭活疫苗(DBN-SX07株)。用 本发明的疫苗免疫猪，可较早产生均一且有效的免疫力，明显缩短PCV2感染 窗口期，延长免疫持续期，从而减少加强免疫次数，降低免疫成本。

本发明的另一目的在于提供该猪圆环病毒II型灭活疫苗的制备方法。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

本发明提供一种猪圆环病毒II型灭活疫苗，该疫苗的毒种为猪圆环病毒II型 DBN-SX07株，保藏号为：CGMCC No.3064，上述毒种经烷化剂灭活后作为 抗原，按比例加入油佐剂乳化配制而成。

本发明中用于灭活病毒的烷化剂可为β-丙内酯、甲醛和戊二醛等烷化剂， 但为更好的达到本发明的效果，本发明优选0.5‰-1‰的甲醛溶液。

本发明的猪圆环病毒II型灭活疫苗，抗原与油佐剂的比例为1∶1-1∶5。

其中，油佐剂包含90-98wt％的白油、2-10wt％的司本-80。将重量百 分比为90-98％白油与2-10％司本-80混合，100毫升混合液中加入1-2克 硬脂酸铝即得本发明的油佐剂。

本发明还提供了该猪圆环病毒II型灭活疫苗的制备方法，其步骤如下：

(1)生产用毒的制备

取猪圆环病毒II型DBN-SX07株毒种接种PK15a，按常规条件培养、收获， 作为生产用毒；

(2)生产用毒的灭活

将烷化剂按比例加入生产用毒中，37℃条件下灭活16-24小时，期间振荡 4-5次；

(3)乳化

按比例加入油佐剂，乳化配制成灭活疫苗。